载体的构建93974.docVIP

基因工程所用的克隆载体常称之为分子克隆载体（molecular cloning vector），它是一类可供外源DNA插入并携带重组DNA分子进入适当宿主细胞的DNA分子。如果打一个十分浅显的比喻，分子克隆载体犹如航天技术中的运载火箭，外源DNA分子就如火箭上搭载的卫星，宿主细胞则如外部深邃的空间。分子克隆载体的主要功能就是将外源基因携带入宿主细胞，并在宿主细胞中进行DNA扩增和使外源基因得以高效表达。在这一点上又与火箭不一样，因为火箭在运载卫星的过程中分级脱落和烧毁。尽管克隆载体是由DNA分子所构成，但与宿主细胞的染色体DNA分子相比，它们一般都比较小。比如常用的质粒载体多数都在10 kb以下，而常用的噬菌体载体，一般都在20 kb左右。我们知道，大肠杆菌的染色体DNA是4200kb。正是由于克隆载体的分子量比较小，在操作过程中不会造成载体DNA分子的断裂，而大分子的DNA容易在操作中发生断裂。克隆载体的基本结构和功能在短短的20年间，用于不同生物和不同目的的分子克隆载体至少也有好几千种，那么它们应该有些什么样的基本结构呢？经过仔细分析发现，所有的分子克隆载体都具备了以下3个最基本的结构：1） 至少有一个复制起点，因而至少可在一种生物体中自主复制；2） 至少应有一个克隆位点，以供外源DNA插入；3） 至少应有一个遗传标记基因，以指示载体或重组DNA分子是 否