酶的分离纯化43552.docVIP

酶的分离纯化 提取原则 a. 相似相溶。 酶提取时首先应根据酶的结构和溶解性质，选择适当的溶剂。一般说来，极性物质易溶于极性溶剂中，非极性物质易溶于非极性的有机溶剂中，酸性物质易溶于碱性溶剂中，碱性物质易溶于酸性溶剂中。 酶都能溶解于水，通常可用水或稀酸、稀碱、稀盐溶液等进行提取，有些酶与脂质结合或含有较多的非极性基团，则可用有机溶剂提取。 b. 远离等电点的pH值，溶解度增加。 酶的提取方法 提取方法 使用的溶剂或溶液 提取对象 盐溶液提取 0.02～0.5mol/L的盐溶液 用于提取在低浓度盐溶液中溶解度较大的酶 酸溶液提取 PH2～6的水溶液 用于提取在稀酸溶液中溶解度大，且稳定性较好的酶 碱溶液提取 PH8～12的水溶液 用于提取在稀碱溶液中溶解度大且稳定性较好的酶 有机溶剂提取 可与水混溶的有机溶剂 用于提取那些与脂质结合牢固或含有较多非极性基团的酶 酶的分离方法 1沉淀分离 沉淀分离是通过改变某些条件或添加某种物质，使酶的溶解度降低，而从溶液中沉淀析出，与其它溶质分离的技术过程。 沉淀分离方法 分离原理 盐析沉淀法 利用不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同的特性，通过在酶液中添加一定浓度的中性盐使酶或杂质从溶液中析出沉淀从而使酶与杂质分离 等电点沉淀法 利用两性电解质在等电点时溶解度最低以及不同的两性电解质有不同的等电点这一特性，通过调节溶液的