阅读质粒图谱的方法.docVIP

阅读质粒图谱的方法一、一个合格质粒的组成要素??复制起始位点Ori( 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。??抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+( ,Kan+??多(克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段??P/E( 启动子/增强子??Terms 终止信号(??加poly（A）信号( 可以起到稳定mRNA作用二、如何阅读质粒图谱第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。（1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。（2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。（3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。（4）neor（kanr） 氨基糖苷磷酸转移酶 使G418（长那霉素衍生物）失活（5）hygr 使潮霉素β失活。第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖