1006神经生长因子的提取及其对MGC_803细胞的凋亡作用1003.pdfVIP

广 西 医 科 大 学 学 报 　2008 A ug ; 25 (4) ·526 · J OU RN AL O F GU AN GXI M ED ICAL UN IV ER SIT Y 神经生长因子的提取及其对 M GC803 细胞的凋亡作用 1 2 △ 韦 　敏 　宋 　慧 　班建东 　蒙 　怡 　石庆秋 　徐阳曦 　陈　缨 　张学荣 (广西医科大学蛇毒研究所 　南宁　53002 1) ( ) 摘要 　目的:从广西眼镜蛇蛇毒中提取神经生长因子 nerve growt h factor ,N GF 并探讨其对人 胃癌 M GC803 细胞的生长抑 制作用 。方法 : ①粗毒采用 Sep hadex G75 凝胶过滤及 CM Sep haro se CL6B 阳离子交换柱进行分离纯化 ,洗脱峰用大鼠嗜铬 ( ) 神经瘤细胞 PC12 细胞 测定活性 , 通过 SD SPA GE 测定纯度和相对分子质量 ; ②采用 M T T 法 , 以N GF 浓度分别为 75 、15 、 30 、60 、120 mg/ L 处理人胃癌 M GC803 细胞 24 h ,观察不同浓度 N GF 对 M GC803 细胞的毒性和生长抑制率 ; ③采用 AO/ EB 双重染色法 ,N GF 浓度分别为 25 、50 、75 mg/ L ,观察不同浓度 N GF 作用后细胞染色及形态的变化 ,计算细胞凋亡率 ; ④An nexin VFITC/ PI 双标记流式细胞术检测细胞凋亡率变化 。结果 : ①所得 N GF 为单一组分 ,SD SPA GE 结果为一条带 ,相对分 子质量约为 23 000 ,对 PC12 细胞有良好的促进分化作用 ; ②N GF 对 M GC803 细胞的生长有抑制作用且呈剂量依赖关系 ,作 用 24 h 的 IC50 值为 499 mg/ L ;荧光显微镜下可观察到凋亡细胞主要特点为 :细胞体积缩小 ,染色质固缩 ,橘红色荧光增强 ,各 浓度组与对照组的细胞凋亡率比较有明显差异( P 00 1) ;流式细胞仪检测到早期细胞凋亡率随 N GF 浓度的增高而增加 ,各 浓度组与对照组的细胞凋亡率比较有明显差异( P 00 1) 。结论 :采用 Sep hadex G75 凝胶过滤及 CM Sep haro se CL6B 阳离 子交换柱提取得到的眼镜蛇毒 N GF 能诱导人胃癌 M GC803 细胞凋亡且呈剂量依赖关系 。 关键词 　神经生长因子 ;M GC803 细胞 ;细胞凋亡 ( ) 中图分类号 :R9963 　　　文献标志码 :A 　　　文章编号 :1005930X 2008 ( ) 　　眼镜蛇毒神经生长因子 N GF 是第一个被发现 ,也是 目 蛇毒研究所提供 。 前为止研究得比较清楚的一个神经营养因子 。近来的研究 12 　N GF 的分离纯化及鉴定 :按文献[4 ]进行并改进 , ( 1) 眼 显示 ,N GF