Rhooccussp.R04羟基联苯1,2-双加氧酶多样性及其功能研究.docVIP

Rhodococcus sp.R04羟基联苯1，2-双加氧酶多样性及其功能研究 【摘要】：联苯的氯代衍生物多氯联苯(PCBs)是广泛应用的重要工业原料。它是一种严重的环境污染物,对人类有致癌作用。多氯联苯的微生物好氧降解是通过联苯代谢途径进行的。联苯的上游代谢途径需要四个酶的参与,其中2,3-二羟基联苯双加氧酶(BphC)属于外部双加氧酶的一种,它在联苯和多氯联苯的降解中是一个非常关键的酶,其结构,功能和底物特异性等方面已成为该领域研究的热点。Rhodococcussp.R04基因组测序发现,该基因组中含有8个bphC基因,分别命名为bphCl至bphC8。基于氨基酸序列的相似性和外部双加氧酶的分类,BphCl,BphC2,BphC3,BphC8属于类型I,BphC4,BphC5,BphC6,BphC7属于类型。8个BphC之间的氨基酸序列相似性为11%～77%。根据全基因组序列设计引物,从Rhodococcussp.R04基因组中扩增出8个bphC基因,将它们分别克隆到表达载体pBV220-His中,并获得了表达。用离子交换一步层析,获得了电泳纯的BphC8,SDS和分子排阻层析表明它是一个亚基分子量为35KD左右的同源六聚体。最适温度和最适pH分别为20和9.0。我们将bphC2克隆到温度诱导的表达载体pBV220和化学诱导的表达载体pET21a中,构建了重组质粒pBV220-