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- 2017-08-31 发布于重庆
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植物组织RNA提取的难点及对策84424.doc
植物组织RNA提取的难点及对策
从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析,纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库,RT-PCR及差示分析等分子生物学研究,都需要高质量的RNA。因此,从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。
从文献报道上看,有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA,而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。一般认为在这些植物组织中,或富含酚类化合物,或富含多糖,或含有某些尚无法确定的次级代谢产物,或RNase的活性较高。在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的,但当组织被研磨,细胞破碎后,这些物质就会与RNA相互作用。酚类化合物被氧化后会与RNA不可逆地结合,导致RNA活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA的丢失,或形成不溶性复合物;而多糖会形成难溶的胶状物,与RNA共沉淀下来;萜类化合物和RNase会分别造成RNA的化学降解和酶解。对于这些植物材料,用常规的RNA提取方法(如胍法、苯酚法和十六烷基三甲基溴化胺法等)难以提取出其RNA。如Lбpez-Gбmez等在用常规的方法提取芒果果实的RNA时未能成功,他们的结果分为三种情况:提出的RNA已被降解;RNA的得率很低;得到的RNA不能进行体外翻译。他们认为在果实成熟时各种酶的活性增强,其中也包含RNase,不溶性的淀
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