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CN 431262/ R 中国动脉硬化杂志2004 年第 12 卷第 2 期 125
( )
[文章编号] 2004 1202012506 ·实验研究·
热休克预处理抑制过氧化氢所致 C2C12 肌原细胞
释放天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物及细胞凋亡
蒋碧梅 , 肖卫民, 石永忠 , 刘梅冬 , 唐道林 , 肖献忠
( 中南大学湘雅医学院病理生理学教研室 ,湖南省长沙市 410078)
[关键词] 病理学与病理生理学 ; 肌原细胞内源性保护机制 ; 热休克预处理 ; 热休克蛋白 ; 凋亡 ,肌原细
胞 ; 第二种线粒体 ; 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物 ; 过氧化氢
[摘 要] 为探讨热休克预处理对过氧化氢所致 C2C12 肌原细胞凋亡和第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半
胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体释放的影响 ,采用 0. 5 mmolL 过氧化氢作用于 C2C12 肌原细胞。Hoechst33258 荧光
染色 ,观察细胞形态学改变并计算凋亡百分率 ,抽提 DNA 作琼脂糖电泳 , 以确定细胞凋亡情况。采用天冬氨酸特异
性半胱氨酸蛋白酶活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹观察天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3 ,天冬氨酸特异性半
胱氨酸蛋白酶 9 的活化情况。采用免疫荧光及细胞成分分离后蛋白质印迹检测第二种线粒体释放的天冬氨酸特
异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体的释放。结果发现 ,过氧化氢处理 1~2 h ,第二种线粒体释放的天冬氨酸特
异性半胱氨酸蛋白酶激活物逐渐从线粒体释放入胞浆 ;处理 4 h 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3 ,天冬氨酸特异
性半胱氨酸蛋白酶 9 活性升高 ,12 h 达高峰 ;处理 24 h 细胞明显出现凋亡 ,凋亡百分率明显升高。热休克预处理可
α
诱导 C2C12 肌原细胞中热休克蛋白 90 ,热休克蛋白 70 及 B晶状体蛋白的表达增高;抑制第二种线粒体释放的天
冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物释放、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3 ,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9
的活化及细胞凋亡的发生。结果提示 ,线粒体信号通路在过氧化氢所致的心肌细胞凋亡中发挥重要作用 ;热休克
预处理通过抑制上述通路而减轻过氧化氢所致的细胞凋亡 ,其机制与其诱导热休克蛋白表达、阻断第二种线粒体
释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体向胞浆释放、从而抑制天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3 ,
天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9 的活化有关。
[ 中图分类号] R36 [文献标识码] A
Heat Shock Pretreatment Inhibits the Second Mitochondriaderived Activator of Caspases
Release from Mitochondria and Apoptosis of C2C12 Myogenic Cells Induced by Hydrogen
Peroxide
J INAG BiMei , XIAO WeiMin , SHI YongZhong , LIU MeiDong , TANG DaoLin , and XIAO XianZhong
( Department of Pathophysiology , Xiangya Medical College , Centralsouth University , Changs
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