急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征患者NPM基因突变的研究论文.pdfVIP

·44· 大会发言 急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征患者 ‘一 NPM基因突变的研究 张悦张美荣杨琳肖志坚 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院；实验血液学国家重点实验室(天津，030020) 【摘要】 期患者)，MDS患者38例，用基因组DNA 突变患者，将PCR产物克隆至pUCm—T载体，转化大肠杆菌DH5Ot，至少挑选5个以上重组克隆，小量制备质 粒后进行测序。结果共发现NPM突变患者6例(AML4例，MDS2例)，A型突变4例，B型突变1例，新发现 有NPM基因突变，为进一步研究NPM突变与AML及MDS发生的关系提供了重要的新线索。 【关键词】 白血病，急性，髓系；骨髓增生异常综合征；NPM基因；突变 步研究，现报道如下。 1资料与方法 1．1对象 一 Mtl例，M2 12例，中位年龄44岁(14—70岁)。按WHO标准进行诊断分型，其中RA10例、RAS1例，RCMD4例、 RAEB-I 6例、RAEB—II 11例、5q一综合征1例。与患者无血缘关系的健康志愿者19名。 1．2染色体核型分析 患者骨髓细胞经24 定核型异常。 1．3基因组DNA提取 取患者骨髓及正常人外周血5ml，常规分离单个核细胞并提取基因组DNA。 1．4 设计及PCR条件参见文献[sl。 1．5 NPM基因扩增 参照文献(1】设计合成NPM基因exon 5’一，rIAACTCTcTGGTGGl’AGAATGAA一3’，扩增产物为560 史堡堡堂全签丛昼全垦自奥疸鲤监璧筮真厘全垦蕉迨丝自查瘟堂垄堑过金迨塞堑缝 ·45· bp。PCR扩 mmol／L的dNTP，引物浓度为250 增体系为20山，含o．2斗g基因组DNA，0．2 oC1 min。PCR产物 预变性5min后，94℃30s，55 min，72℃1min，共40个循环，最后一个循环72℃延伸10 进行1．5％琼脂糖电泳。 1．6 NPM基因扩增产物序列分析 PCR产物经10 以5。一GGcAnⅡ’GGAcAAcAcA一3’序列为测序引物圆，用ABI 试剂盒(上海生工生物工程技术服务有限公司)按说明书说明连接至pUCm—T载体。连接产物转化感受态细菌 E．coil DH5仪，接种至含100 小量制备质粒然后进行测序，根据序列分析结果确定患者突变类型。 2结果 处插入CATG，此外我们在另1例患者发现了一种迄今文献尚未报道的新的突变类型，为965 5个 bp一969bp 1)。 表1 NPM突变患者核苷酸、蛋白序列及主要临床特征 N。．突变类型 NPM核苷酸序列及蛋自序列 性别 年龄 诊断 染色体核型 f要磊甄生存(月) Wt gatctctggcagtggaggaagtctctttaagaaaatag D LWOWRKS L stop 1 A型 gat aa／ttag F 19 M4 46，xx[11】 11．1 存活45 ctctgt啦gcagtggaggaagtctctttaaga D