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提高芯片毛细管电泳性能的研究 殷学锋戚丽雅张磊刘金华 浙江大学微分折系统研究所310027抗卅f 芯片毛细管电泳技术是礅全分析系统的一个重要分支，田为菩片毛细营电泳散热性能好．可以 施加更高的场强，分离速度侠、效率高．样品和试剂用量少，并可以剥阁其网络结构将多种分析功 能集成庄一起，已应用下DNA测序、基困分析、蛋白质分析，药物筛选厦组合化学等领域。但芯片 毛细管电泳电泳存在以下缺点：l电动进样时间较长，一般需要10-150秒。2难以改变进样体积3 浓度检测下限不够低。针对这些问题．我们进行了以下研究以提高系统的采样频牢，任意改变进样 体积和提高芯片毛细管电泳的检测灵敏度。 1．用负压进样{壹握高苍片毛纽管电泳的采样频率 原理：庄进样阶段，在微流控芯片样品废液池中施加负压。由于样品池中的样品、缓冲藩液池和缓 冲溶渡废液池中的缓冲溶液在大气压的作用下同时通过微流控芯片交叉处流八废液池，在进样通道 和分离通道的交叉处形成稳定的样品痒(幻；在分离阶段，使样品废液池与大气相通，它与其他液池 之间的压力差立即届时消失，微流控芯片交叉处形成皮克级的样品塞被加在分离通道上的电场所产 生的电溶流带八分离通道分离测定(”。 5“ a ”I b 6W Il 。 二 。“同 。 ”．．【 ．- 0v “ 1 S r9，’ 。_…。 圈I盘压进挥的■理田 用柱謇泵的芯片毛细管电泳进样装簧如图2所示．它用柱塞泵产生负压．用三通阀通过接口控 置样品废液池上方由负压向常压切换。由一个无需控制的单路高压电源进行电泳分离。在3秒内将 样品塞无歧砚地注入分离通道；进样重现性好，适用于易改变通道表面性质的复杂样品分析：连续 测定56次，平均迁移时间的相对拓准偏差15％(RSD)。操作简便．分析过程中无{|言电压切换， ‘} rB 4-!～^ 图2用桂塞泉的。片毛自口电泳进样装置 目3月m■#2采*样*i 单次测定样品消耗70nL。由于微量柱塞泵和三通阀价格昂贵，每套泵阀价值I万多元，柱塞泵和暑通 捌盒华．现在杭州师m太学I作 阀必须在计算机软件控制下运行，因此我们又建立了用微型真空泵产生负压．用三通电磁阎控置样 品废液池上方由负压向常压切换的进样装置(图3)．进样时间进一步缩短至05s，负压进样装置硬 件成本低，负压稳定可控，并可用于阵列通道中多样品的同时进样。 2．任意改变进样体积进样法 将筛分介质只充填在从缓冲废液池(Bw)到微流控芯片十字交叉IZI这一段分离通道中，微流控芯 片的其他通道，包括进样通道(s—SW)和缓冲池(B)到通道十字交叉口之间的分离通道充填电泳缓冲 液。在微流控芯片上的样品储液池S中加入样品溶液，在其他储液池B、SW加入不同体积的电泳 缓冲浈，控制液面高度，使HBHsHs卅在进样阶段，在微流控芯片样品废液池中施加负压。由于 样品池中的样品、缓冲溶液池中的缓冲溶液在丈气压的作用下同时通过微流控芯片交叉处流入废渡 池，由于BW池到微流控芯片十字交叉口这一段分离通道充填的凝胶阻力很大．因此无缓冲溶液从 SW池中通过微流控芯片交叉处而流^样品废液池(图4右目。与此同时，样品溶液带电荷的离于在 流经微流控芯片交叉处时被加在分离通道间电场力的驱动下，进^充填筛分介质的分离通道中，进 入筛分夼质的样品塞长度与进样阶段的持续时间成正比峰高(图4右b‘)在分离阶段，使样品废液 池与大气相通，样品池巾的样品停止通过礅流控芯片交叉处流入样品废液池，已进入筛分介质的样品 塞被加在分离通道上的电场所产生的电场力分离测定。通过优化各储液池的液面高度，可以防止样 品溶液在分离时进入分离通道而影响分离效果(图4d