REACH法规第五卷译稿-7.docVIP

II部分 DOC消耗法（方法C.4-A） II．1方法原理 一定已知体积的疫苗矿物培养液，包含一已知浓度测定物(10-40mg/L)，微量的有机碳在黑暗中或散射光中进行氧化。 生物降解由DOC方法在28天同一周期内极短时间间隔进行测定。降解百分数由DOC浓度进行表达和计算(经过疫苗空白组的校正)。总的生物降解百分数可由开始时和结束时化学物分析实验结果进行计算。 II.2.方法描述 II.2.1仪器 锥形瓶,如250mL到2L。决定与需要进行的DOC分析的溶液体积。 振摇机(摇动锥形瓶)，或自动温度控制器或恒温房,保证足够的能量和所有瓶中富含氧气。 过滤装置,合适的过滤膜。 DOC分析仪。 溶解氧测定仪。 离心机。 II.2.2.无机矿物液的准备 为了准备储备液,见I.6.2 用800mL水混合10mL溶液(a),加入10mL溶液(b)到(d)中,稀释到1升. II.2.3疫苗的准备和预处理: 疫苗可从各种途径获得:活化污泥,下水道污水,地表水,以及以上的混合物, 见于I.6.4, I.6.4.1, I.6.4.2 和I.6.5 . II.2.4试剂瓶准备. 举例来说,将800mL无机培养液加入到 2L锥形瓶,加入足量的测定物和参考物的储备液,使化学物质浓度相当于10-40mg/L,检查并对pH值进行调节,有必要的话,调至7.4。锥形瓶中加入活化污泥或其他疫苗源,是最终溶液浓度不大于30mg悬浮物/升.同时准备疫苗对照组,无参照物或无测定物.若需要,用一个容器检验包含相当的测定物或参照物的矿物培养液的可能抑制作用. 同样,若有需要,进一步建立无菌组,检查测定物是否已被无机降解,方法使用测定物的无菌溶液 .另外,如怀疑测定无可能被玻璃,沉淀物严重吸附,预先做一个评估,以测定吸附的程度,然后决定该方法对此化学物是否合适(见表1)。 将每个瓶用矿物培养液稀释到1升,混匀后,从每个瓶中取出样品,调试初始时DOC(见附录II.4)盖上锥形瓶,如用铝箔,这样可是空气自由流通.然后将容器放入到振摇机中开始测定。 II.2.5.典型流程使用试剂瓶 1号瓶和2号瓶:悬浮测定. 3号瓶和4号瓶:疫苗空白对照组. 5号瓶:过程控制组(有必要的话用此更好) 6号瓶:无菌对照组 7号瓶:吸附对照组 8号瓶:毒性对照组 见I.6.7. II.2.6测定步骤 整个测定中,在已知的时间间隔内重复测定DOC浓度.间隔要尽量短，保证测定10天观测起开始时和结束时的百分数变化，每次的测定取的溶液体积尽可能小。 为了防止取样时造成瓶中的液体挥发损失，有必要的，不加少量的水。取样时应混匀培养液，使粘附在瓶壁上的样品溶解或悬浮，取样后立刻用膜过滤或离心分离.在同一天内分析过滤或离心的样品，否则存储在2-4度环境中，最多不超过48小时,或在低于-18℃下保存更长时间。 II.3.实验数据和实验结果报告 II..3.1实验结果处理 计算时间t生物降解百分数,按I.7.1方法(DOC测定),或选择I.7.2方法(特殊分析)计算所有提供的数据. II.3.2数据的有效性 见I.5.2 II.3.3.实验结果报告 见I.8. II.4数据记录格式 后面有一个数据表格例子 DOC消耗法测定 实验室 开始时的数据纪录. 测定物 名称 储备液浓度:mg化学物/L 培养液中起始浓度:mg化学物/ L. 疫苗 来源. 处理方法 预处理（有的话）。 反应混合物中悬浮物的浓度mg/L。. 5有机碳测定 有机碳分析： 试剂瓶序号 N天以后的DOC（mg/L） 0 n1 n2 n3 nx 测定物加疫苗 1 a1 a2 a(平均) Ca(t) 2 b1 b2 b(平均) Cb(t) 无测定物的疫苗空白试验 3 c1 c2 c(平均) Cc(t) 4 d1 d2 d(平均) Cd(t) 6原始数据处理 试验瓶号 N天后生物降解百分数 0 n1 n2 n3 n4 1 0 2 0 平均（*） 0 （*）D1 和 D2如果条件不同不能取平均。 注意：毒性测定与参照物测定可用类似格式。 7吸附对照组 时间（天） 0 T 无菌对照组DOC浓度（mg/L） CS(0) CS(t) 8. 特殊化学分析(可选择) 在试验结束时, 初级降解%试验的残余量 (mg/L) 无菌 Sb 接种 Sa 培养基