产细菌素乳酸菌筛选及鉴定.docVIP

产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定 摘 要：采用琼脂平板扩散实验，从湖南传统发酵腊肉和香肠中筛选出3株对单核增生李斯特菌（Listeria monocytogene54002）具有明显抑制作用的乳酸菌，排除酸和过氧化氢的干扰后，仍具有抑菌活性，而用胰蛋白酶和胃蛋白酶处理以后，其抑菌活性消失，因此确定该抑菌物质为蛋白质类物质，即细菌素。三株菌所产细菌素具有一定热稳定性，在pH5～10之间仍具有一定的抑菌活性。通过生理生化实验和16S rRNA基因序列分析对3株菌进行了鉴定。PCR扩增得到1600bp左右的16S rRNA基因序列，将序列通过BLAST软件在NCBI网站上进行同源性对比，并通过MEGA5.0软件绘制系统发育树。结果显示3株菌的16S rRNA序列和数据库中的屎肠球菌的序列同源性均在99%以上，这与生理生化实验初步鉴定结果一致。 关键词：细菌素，筛选，屎肠球菌 Identification and screenging of bacteriocin-producing lactic acid bacteria Abstract：Three lactic acid bacterium were isolated from Hunan traditonal fermented meats，which exhibited strong inhibitory activity against Listeria monocytogenes 54002. After eliminating the interference factors such as the organic acids，hydrogen peroxides，the inhibitory activity still existed. But inhibitory activity was lost after treatment with trypsin and pepsin. Therefore，the inhibiotory substance could be classed as bacteriocin. The bacteriocin exhibited good thermal stability and its active pH range from 5~10. The three bacteriocin-producing bacteria were identified on the base of physiological and biochemical characteristics and 16S rRNA gene sequence. The sequence fragments around 1600bp 16S ribosomal RNA were amplified from total DNA of the three isolated strains by PCR. The sequence was completed by the application of BLAST on the websites of NCBI and phylogenetic tree was drawn with MEGA5.0. According to the high homology of 16S rRNA sequence， the three bacteriocin-producing bacteria was identified as Enterococcus faecium. Key words：bacteriocin；screening；Enterococcus faecium 细菌素是由某些细菌产生的一类抑菌物质，是 由细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一 类多肽类物质 [1] 。细菌素的抑菌范围一般包括一些亲 缘关系相近的细菌，而产生菌对其细菌素具有自身 免疫性 。目前研究最为深入的细菌素是乳酸链球菌 肽（ Nisin），又称乳酸链球菌素，是由乳酸链球菌产生 的一种多肽，它于 1969 年得到 FAO 和 WHO 的认可，是 唯一允许作为防腐剂在食品中使用的细菌素，虽然 细菌素已被许多国家允许作为食品添加剂放入食品 中，但是也存在很大的缺陷，比如抑菌谱较窄，抑菌 活性在碱性条件下不稳定 [2] 等，寻找高产细菌素以及 更稳定的细菌素成为研究的热点。作为细菌素的主 要产生菌，乳酸菌生境广泛，数量众多。近年来，国内 外学者为获得结构新颖 、抑菌活性更为稳定的细菌 素，广泛地从当地传统的发酵食品中，尤其是发酵肉 制品中进行产细菌素乳酸菌的分离筛选 。 如 de Carvalho从意大利salami香肠中 [3] 分离到一株