岛津LC-20A型高效液相色谱仪操作规程.docVIP

岛津LC-20A型高效液相色谱仪操作规程 一、开机 配制流动相，一般A相为有机相，B相为水相，盐或其它添加物一般放在B相中。除色谱纯有机相和高纯水以外物质的流动相一定用0.45μm滤膜过滤才能使用。稍微松开瓶盖，超声脱气20分钟。 安装色谱柱，注意柱子上的箭头指示流动相的流动方向。 将流动相滤头放入相应的溶剂瓶中。 依次打开泵、柱温箱、检测器电源，一定最后打开CBM的电源。 排气：将A、B泵排液阀逆时针旋转打开，分别按purge键，冲洗大约3min后自动停止，拧紧各排液阀。 检查输液泵的压力显示值，正常值应该在-0.3~0.3Mpa之间。 打开PC电源，双击桌面的LCsolution工作站图标，打开操作栏下的分析“仪器1”图标，弹出Login窗口，直接点击确定，“哔”的声音之后，表明已联机。 二、参数设置和系统平衡 参数设置 泵设置：在数据采集窗口的仪器参数视图中设置分析条件，如流速、流动相梯度程序、柱箱温度、数据采集时间等参数。 PDA检测器设置：点右键可选择显示窗口，选择需显示波长和信号量程；在normal下可输入数据采集时间，进入Advance，可选择光源、波长范围、检测池温度一般选默认40度、狭缝宽度1.2nm。 RI检测器设置： 极性选+，分析模式、温度通常40度，响应通常1.5s、输出选电压，其它选择默认，点击R-flow清洗参比池，一般需20min，点击balance，值应在±50之间；按Zero调零。 保存方法至指定位置，或者调用已保存的分析方法，确认所需参数。点击下载按钮传送参数至仪器。如果此时系统控制器尚未激活，需点击“仪器 开/关按钮”激活，系统每个模块即以新参数开始运行。 点击“采集”菜单栏下的“绘图开始”，预览基线。在初始流动相条件下以设定速度平衡柱子至基线稳定，一般需要30min（此时进样阀处于Inject状态以冲洗定量环上的残留物质）。 三、样品分析 根据需要选择定量方法，配制相应的定量用标准样品： 外标法：配制系列浓度标样，做相应的标准曲线。 内标法：向实际样品中定量加入标准物质。 点击分析界面左侧的“单次运行”按钮（快捷键栏绿色按钮），编辑样品名，软件默认当前方法，数据保存选择编号自动递增，单击“确定”后出现一个“数据采集开始”小窗口。用手动进样阀上样，把进样器扳到“inject”位置后数据采集自动开始。（此时保持进样器处于“inject”位置，以冲洗定量环。） 数据再处理 打开 “再解析”，弹出Login（登录）窗口，直接点击确定进入数据分析画面。以外标法为例： 参数设置： 点击左边“助手栏”的“PDA数据分析”图标，点击“助手栏”右侧“数据管理器”中“项目在： 选择浏览文件夹”按钮，打开样品数据文件夹。 双击要处理的数据文件，右键选择菜单栏中的“显示多色谱图表”，在波长栏里输入波长值，显示栏里打对勾，带宽值输入4nm，根据需要可输入多个波长值，然后点击确定。 点击左边“助手栏”的“向导”图标，选择测量通道（波长），输入斜率值（slope）和最小峰面积值（Min），其他项目使用默认值。点击右边的“Program”图标进入，点击色谱图中的放大按钮放大色谱图，确认色谱峰积分正确，可进一步填写积分时间程序计算色谱峰，点击确定退出。 点击下一步，在需要计算的色谱峰保留时间前打勾，点击下一步，选择计算方法为外标法，计算对象为峰面积，输入标准工作曲线中的工作点个数，曲线拟合类型为线性，选择工作曲线是否过原点，权重方法选择无。选择标准工作曲线的X轴代表浓度，输入浓度单位名称、浓度值小数点后位数，组类型选择未使用，点击下一步。 峰定性一般选择时间窗方法，窗口值一般输入5%，峰筛选选择最近的峰，保留时间的更新一般选择无，点击下一步。 在名称栏里输入峰名称，峰类型栏里选择默认的目标峰，浓度栏里输入每个标准样品里各组分的浓度值，点击完成，退出。 点击“助手栏”中的“应用到方法”图标，将向导中各参数内容保存到相对应样品分析方法中。 批处理参数设置： 点击“助手栏”中的“返回”，点击“批处理”图标，点击右侧“数据管理器”中“项目在： 选择浏览文件夹”按钮，选择需要批处理的数据文件夹。 点击“文件”菜单→新建批处理文件，编辑菜单→按选定的数据文件行添加，找到并选择标准样品数据文件，点击下箭头依次加入，点击确定退出。 填写批处理表，输入样品名称与ID，在第一个标准样品的样品类型栏中选择标准与初始化校准。其他标准样品的样品类型选择标准和增加校准级别并退出。在方法文件栏里选择刚才保存的向导方法文件，数据文件栏里确定标准样品的数据文件，在级别栏里输入标准样品的级别号。 点击左边助手栏的批处理开始图标，在跳出的对话框中输入批处理文件名并保存。批处理表中数据文件开始依次计算，计算完毕后，“返回”。 查看标准工作曲线：点