分光光度法测定铁的含量.docVIP

实验二十二 分光光度法测定铁的含量时λmax的选择 【目的要求】 1．学习分光光度法原理及722分光光度计的使用方法。 2．掌握分光光度法测定有色物质时最大吸收波长的选择方法。 【基本原理】 凡是被测组分本身具有颜色，或被测组分本身无色，但与适当的显色剂作用后能生成有色物质者，都可用分光光度法进行测定。物质对单色光的吸收遵守光吸收定律──朗伯-比尔定律： 式中，A为吸光度；K为吸光系数；c为溶液浓度；l为溶液厚度。 物质对单色光的吸收因波长的不同而异，在某一波长处出现吸收最大值，某一波长处出现吸收最小值。因此用各种波长的光依次分别通过某种有色溶液时，测定吸收值，然后以吸收值为纵坐标，波长为横坐标作图，即得吸收曲线，由吸收曲线找出最大吸收波长λmax。物质在最大吸收波长处进行测定时，分析的灵敏度最高。 当pH为4～8时，Fe3+和磺基水杨酸生成橙红色配合物。 【仪器和药品】 10ml容量瓶，722型分光光度计，1ml吸量管，KJ型可调连续加液管，pH=4.7的缓冲溶液，擦镜纸，0.1mg·ml-1标准Fe3+溶液，0.2mol·L-1HNO3，0.25mol·L-1磺基水杨酸。 【实验步骤】 1．用10ml容量瓶4个，编号后按表配制标准溶液。 2．在不同波长处测定溶液的吸光度 将上述配好的溶液摇匀后，在722分光光度计上测定。以1号溶液为空白，在波长400～600nm范围内，每隔10nm测定１次2号溶液的吸光度，测定过程中，每变换一波长，都应调整零点及百分透光率（100％）。记录各波长处溶液的吸光度（A），然后以吸光度为纵坐标、波长为横坐标绘制吸收曲线，从而选择出磺基水杨酸测定Fe3+的最大吸收波长。3，4号溶液同法测定。 【问题讨论】 为什么每次变动波长都应重新调节零点及百分透光度？ 【附注】 1．0.25mol·L-1磺基水杨酸的配制 称取54g磺基水杨酸溶于500ml蒸馏水中，加入100m1 10mol·L-1的氨水50～60m1，并用蒸馏水稀释至1000ml即得。 2．722型分光光度计的结构和使用方法 （1）插上电源，将灵敏度旋钮调置“1”档。 （2）开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调至测试用波长。仪器预热20分钟。 （3）打开试样室盖，调节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”，将盛1号空白液的比色皿处于光路中，盖上试样室盖，调节透光率“100％”，即可进行测定工作。 （4）将选择开关置于“A”，调消光零旋钮，使数字显示为：“.000”，而后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度A值。 3．注意事项 （1）测试中不可大幅度改变测试波长。 （2）测试完后迅速打开试样室盖。 （3）每台仪器所配套的比色皿，不能与其它仪器上的比色皿单个调换。 （4）最后测定完后，将比色皿冲洗干净，切断电源，罩好仪器。 实验二十三 分光光度法测定铁的含量 【目的要求】 1．掌握722型分光光度计的使用。 2．掌握用磺基水杨酸法测定铁的含量。 【基本原理】 磺基水杨酸是测定铁含量的常用试剂，在pH为4.0～8.0的条件下，与Fe3+离子生成稳定的橙红色配合物，较好地符合朗伯-比尔定律。 【仪器和药品】 10ml容量瓶，722型分光光度计，吸量管，KJ型可调连续加液器，0.2mol·L-1HNO3，0.25mol·L-1磺基水杨酸，pH=4.7的缓冲溶液，0.1mg·m1-1Fe3+标准溶液。 【实验步骤】 1.标准溶液配制 用10ml容量瓶6个，编号后按表配制标准溶液，摇匀放置20分钟。 2．标准曲线的制作 在722分光光度计上，用1cm比色皿，在460nm波长处，以1号溶液为空白，分别测定标准溶液的吸光度。然后以吸光度为纵坐标、溶液浓度为横坐标绘制工作曲线。 3．未知溶液Fe3+离子含量的测定 吸取待测铁溶液lm1，置于10ml容量瓶中，加入0.2mol·L-1 HNO3 0.5m1；0.25mol·L-1磺基水杨酸1.00m1；pH＝4.7的缓冲溶液1.00m1，用蒸馏水稀释到刻度，摇匀，放置20min后，按上述方法测定吸光度。（未知溶液可以和标准溶液同时配制，编号为第7号）。在标准曲线上查出对应的铁的浓度cx（mg·m1-1）。未知液浓度可由下式求出： （mg·m1-1） 式中，V容为测定未知液稀释时所用容量瓶体积；V样为所取原未知液的体积。也可在作图时将各标准溶液的浓度均乘以V容/V样，则可在标准曲线上直接查出未知液的浓度。 【问题讨论】 1．为什么用磺基水杨酸法测