大鼠肺微血管内皮细胞通透系数检测方法.pdfVIP

±旦焦重塞叁墼堕望!!!!堡!旦蔓!!鲞蔓!塑堡垒也￡尘曼!堡坚鲤!皇2塑堡!笪垫!!!y竺!：!!：丝!：! ·547· ·论著· 大鼠肺微血管内皮细胞通透系数检测的方法 尤青海 高磊岳扬孙耕耘 【摘要】 目的 探讨肺微血管内皮细胞(PMVEC)通透系数检测的实验方法。方法分别在transwell 小室和聚碳酸酯纤维膜上构建大鼠PMVEC单层模型，用电阻抗仪和倒置显微镜观察到细胞单层汇合后， 分别应用电阻抗仪监测跨内皮细胞电阻(TER)，用异硫氰酸荧光素(FITC)一葡聚糖法检测通透系数(Pd)， h和2h后的PMVEC通透性变化，以 用Hanks平衡液法检测通透系数(却)}同时观察脂多糖(LPS)刺激0．5 测量值与其相应静息状态值的比值表示。结果倒置显微镜下观察到细胞接种后3d时已汇合成单层时 TER值为(39．45士3．96)0·cm2，Pd值为(8．52士0．50)X10～cm／s；随细胞接种时间增加，TER值稳定升 高，接种后4 cm·s1·cm 分别为(49．84士3．93)n·cm2、(6．15土0．63)×10“cm／s和(6．80士0．62)×10．7H20～。 0．5 与未刺激组比较，10 LPS刺激PMVECh和2h后，TER法测定的通透性均下降(O．87士0．03、 mg／L 法和印法均能有效检测PMVEC通透系数，倒置显微镜联合TER和Pd法所测值更加精确，从而为体外研 究急性肺损伤发病机制提供实验方法。 【关键词】肺微血管内皮细胞；通透性；大鼠；transwell；电阻抗 Metbodsformeasurementof coefficientof microvascularendothelialcellsinrat permeability pulmonary YOU Lei，YUE of Medicine，theFirst Qing-hai，GAOYang，SUNGeng—yun．DepartmentRespiratory AnhuiMedical 230022，Anhui，China Affiliated of HDspiral University，Hefei author：SUN Corresponding Geng-yun，Email：sungengyun@yahoo．corn．cn To an methodforthemeasurementof microvascular [Abstract]Objectiveexploreoptimal pulmonary endothelial coefficient．MethodsA ofratPMVECmodelwas eell(PMVEC)permeabilitymonolayer filteror constructed a eell ontranswell filtermembrane．Afterthe byculturingsuspension polycarbonate stateofconfluenceofcellswasaffirmedwith volt—ohmmeterorinverted epithelial microscope．the coefficientwasdeterminedmeansoftransendothelialelectrical permeabi