林源活性成分液质联用分析技术规程.docVIP

Waters Quattro Premier XE液质联用分析技术规程 一、前处理方法的优化 还可利用同位素标记衍生化。.1打开氮气、氩气瓶开关，检查氮气、氩气压力是否符合要求：氮气=0.7MPa，氩气：0.1~0.2 MPa。 .2检查仪器电源是否与不间断电源连接(电源中线接地，电流需≥13A)。 三、SCAN确定母离子的质荷比 1点击“MS Tune”进入Quattro Micro仪器调谐窗口，点击菜单栏“Ion Mode”，选择离子模式，用10-100ppm的纯样，Q1 SCAN 察看存在哪些离子，要能够看到待测的母离子，应明显比周围的噪声离子高，通过改变DP，观察离子的增减，若为POS方式，看M+1，M+18，M+23等等，初步判断分子离子，如看不到则可能是浓度太低或离子化方式不合适，或选择的溶剂体系不合适 母离子选M+H，或M-H最好，但有时只有M+NH4，M+Na等，这样CAD能量可能需要高些，选择[M+H]+，还是+NH4，+Na等，要由化合物决定。加合离子若稳定，则可用，不稳定则可能需换流动相，但+H通常好些，所需碰撞能量低，灵敏度高；如含C可选择2个母离子峰。 点击菜单栏“Options”，选“Pump”，质谱仪进入抽真空状态，当达到工作真空（10-4）质谱仪面板上的Vaccum灯由橙变绿色，且离子源开始加热。待离子源温度达到设定值后，点击菜单栏中的API gas图标， 打开氮气阀，点击Operate图标打开仪器的高压电源， 在内置蠕动泵上用注射器官注入调节仪器的标准样品， 点击Syinge Pump 开始蠕动泵进样，然后进行调节仪器。 3.调节灵敏度，可通过调电离源参数使仪器灵敏度达到最佳。在ES＋/ES－ Sourse项下，通过设定Capillary(kv)；Cone(V)；Sourse Temp(℃)；Desolvation Temp (℃)；Gas Flow等参数值，并调整进样探头的位置，使仪器达到最佳灵敏度。一般情况下， Capillary(kv)为2.5~3.5KV；Cone(V)为30~50V；Sourse Temp(℃)为80~120度；Desolvation Temp (℃)150~300度；Gas Flow为450~650升/小时 3.调节分辨率，可通过调四极杆参数使仪器的分辨率与待测样品相适宜。在Analyser项下，设定LM Resolution1； HM Resolution1；Ion Energy；Entrance；Collision；Exit等参数值。 根据待测化合物性质，选择分析的极性(＋/－)、离子化方式(ESI/APCI)，根据分子量选择扫描范围和时间确定母离子的质荷比，准确到小数点后一位。 参数设置：扫描方式：MS Scan；质量范围：100～MW+30，t=1～2sec，Center Width，MW±5Da，t=0.5sec，通过手动调节DP、GS1，使喷雾平稳、有效。 、Product Ion Scan —— 确定子离子的质荷比 通过调节LM Resolution2；HM Resolution2；Ion Energy2等参数，使仪器第二级质谱的分辨率与待测样品相适宜。然后根据MS/MS测试需要，注入调节MS/MS方式的标准样品并将仪器设定为子离子扫描方式， 打开氩气开关，调节氩气压力和碰撞能量，使仪器达到适合测试MS/MS样品的工作状态。得到高质量的MS2图，母离子的强度为图谱中基峰强度的1/3到1/4为宜 平滑后选择子离子质荷比，确定到小数点后一位扫描方式Product Ion Scan；质量范围50到分子量+10的范围。t=1～2sec通过手动调节CE需多次分别调节项， 项和项中参数，使灵敏度和分辨率均适宜，且仪器处于最佳工作状态。 .3测定样品。在内置蠕动泵上的注射器装入被测样品，点击Syinge Pump蠕动泵开始进样。 .4点击Acquire，输入Data File Name、Founction、Start Mass、End Mass等参数，然后点击Start开始正式采集质谱图。 、优化化合物参数 根据前面选出的母、子离子，组建MRM离子对选择多个离子对时，应合理分配每一对的分析时间用“Ramp”，优化Compound项下各参数，以及Source项下CAD参数。各离子对应分别设定。MRM方法优化两次，以得到比较确切的结果MRM选择性更好 再根据上一步确定的母离子进行PRODUCT SCAN，确保所有碎片离子都来自待测化合物，而不是溶液中的杂质，找出较强的碎片离子信息。还可改变CE，从中选定MRM需要测定的一对或更多离子对，为最后LC-MS/MS联用做准备 做PRODUCT SCAN时，注意小数点后的位数，MRM输入要准，灵敏度才高 先多选几个离子对，待出