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HIV实验室检测技术的研究进展 唐任光(右江民族医学院附属医院输血科 广西百色533000) 原体的诊断、指导抗病毒药物的治疗及检出HIV携带者，以阻断HIV的传播途径【l】。早期对HIV的检 测主要是通过血清学试验，检测HIV的抗原／抗体，直接或间接地诊断HIV感染‘引。目前，HIV血清 学诊断仍然是AIDS早期诊断的主要依据¨J，要建立最特异、最敏感、最实用的检测方法，用于监测、 胞检测、核酸病毒载量测定【．1等。随着生物芯片和生物传感技术的飞速发展，HIV的实验室诊断方法 取得了很大的进展，基因芯片技术¨1已成为HIV实验室诊断的发展方向。现就近年来HIV检测的研究 进展作一综述。 l抗原检测 程中起重要作用。P24蛋白的氨基酸序列在HIV各毒株之间高度保守，缺失P24会导致病毒无法正常 组装。机体感染HIV后，F24抗原是最早能从血清中检出的病原学标志，通常感染后约2—3周即可检 出，1—2月左右进入抗原高峰期，然后随着HIV抗体的产生形成抗原抗体复合物。由于抗体的中和作 用，P24抗原浓度不断下降直至难以测出的水平时，标志着HIV感染者进入无症状期。当HIV抗原再 度在血清中增长，意味着病毒的大量繁殖和免疫系统的破坏，常提示感染者已经或即将进入艾滋病发 具有特别重要的作用¨o：①HIV感染的早期诊断；②监测病程进展和预后的判断；③鉴定新生儿感 染，预测母婴垂直传播的可能性；④药物疗效评价；⑤评价新的疫苗；⑥艾滋病基础研究方面的应用。 方法，检测阀值为0．01Pg／rrd。其原理是以抗P24单克隆抗体包被酶联检测板，当加人待测血清后， 若血清中含有P24抗原则与包被抗体形成抗原一抗体复合物，再加入辣根过氧化物酶标记的抗HIV多 克隆抗体，加底物显色后，在酶标仪上读结果。其它新的抗原检测方法有：①免疫复合物裂解检测法 (ImmuneComplex 而增加F24抗原的浓度，提高P24ICD检测的敏感性和检出阳性率，而且热处理方法优于酸碱处理方 法。②超敏感酶免疫测定法(HitrasensitiveEnzyme 性与电子显微镜的高分辨力相结合，实现对病毒颗粒或病毒可溶性抗原的直接特异性检测，灵敏度高。 ④线性免疫酶测定(LinealImmunoenzymatie Core HIVCombi 抗体)包被的聚苯乙烯微球与待测样品、荧光标记物的抗P24／P27第二抗体(检测抗体)以及裂解液 混合孵育。再用流式细胞仪直接测定单个微球上的荧光强度，不需洗去未结合的检测抗体，通过标准 ·173· 曲线对P24／P27抗原的定量分析o“。该方法操作简单、实用性强，检测阀德为o．1—100ng／ml。 2抗体梭测 疫印迹试验(wa)、条带免疫实验(璩A)、放射免疫沉淀实验(RIPA)作为确认试验。 2．1 HIV抗体初筛试验 形成酶结合物，酶结会物能与待榉熬中相应的抗原或抗体结合成为免疫复会物，然黯加入酶底物，经 酶的催化或水解作用，无色底物产生颜色，用肉眼、分光光度计观察结果。作为检测HIV抗体的最主 要方法，其试剂在经过了第l代、第2代、第3代后，已经发展剡第4代检测试剂[6,1t,9J。第1代试剂 主要以病毒裂勰物或部分纯化豹癍毒抗原包羧反应板，瘫于含有宿主成份的污染和杂鬣自的存在，故 假阳性率较高。第2代试剂使用基因工程的薰组或人工合成肽为抗原包被反应板，抗原组成一般包括 3代试赉l，使咫双抗骧夹心法检测抗体，相对第2代试荆敏感性豢所提高。蠢于第3代试剂能同时检出 IgG和IgM抗体，因此可起到缩短窗口期的作用，但仍存在漏检的现象。第4代试剂是在第3代的基础 上增加了P24抗原的检测。同时进行抗体及P24抗原的检测，可提高试剂敏感性，缩短窗口期，减少 急性感染者的窗日期漏梭。与第3代试剂裰比，检出时间接兹4—9天【皤j，窗日期缩短了一瘸多，在 艾滋检病早期诊断的效果上明显优子第3代。但使用第4代试剂对艾滋病进行检测，仍然有2—3周的 窗lZt期。目前使用第4代酶免法测HIV抗体试剂，市售有美国雅培、上海科华等其敏感度几乎100％， 特异性在98。l-99．8％之闯。由此可见，挺高敏感憔、特异性，缩短窿羽期和筒便快捷是HIV检测 试剂未来发展的主要趋势。 2。1．2免疫荧光法(IFA)：免疫荧光法是借助抗体反应进行荧光染色的诊断技术，其原理是 的淋巴细胞涂千玻片上。固定，制备为抗原片，加入待检血清，待检血清中的HIV抗体与抗原结合 后，再