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中文摘要
前 言
恶性肿瘤的生长和转移需要得到充足的营养物质，这需要血
液的运送才能得以实现。因此血管生成对肿瘤的生长和转移非常
重要。目前已知血管内皮生长因子(VEGF)是最有力的血管生成
因子，通过与其特异性受体nt一1、KDR(在鼠的同源序列为Flk一
1)结合来发挥作用，其中KDR是与细胞增殖及有丝分裂密切相
关的受体。已有研究表明，VEGF及其受体在包括乳腺癌、消化道
肿瘤、泌尿生殖系统肿瘤、脑肿瘤以及头颈部肿瘤在内的多数肿瘤
中的表达明显增高，并与其生物学行为相关。；本研究应用半定量
RT—PCR方法检测lO例正常子宫内膜，8例子宫内膜不典型增
生，30例子宫内膜癌组织中KDRmRNA的表达，以探讨其与子宫
内膜癌发生、发展及生物学行为的关系。
f资料与方法
一、资料来源
选择中国医科大学附属一、二院2000年9月一一2002年6月
期间收治的患者48例。其中经手术后病理证实的子宫内膜癌
(Endometrialcarcinoma)患者30例，经手术或诊刮后病理证实的
endometrium)患者8例及正常
子宫内膜不典型增生(Hyperplasia
子宫内膜(Normal endome—
endometrium)5例]。所选患者均
trium)5例，增生期(proliferative
为初治病例，平均年龄48．37±12：04岁。按国际妇产科联盟(FI·
期8例；病理分级Gl级17例，G2级8例，G3级5例；有淋巴结转
移5例；伴有深肌层浸润12例；腺癌22例，其它类型癌8例。
二、主要试剂
KDR及内参照引物由北京奥科生物责任有限公司合成；
RT—PCR试剂盒由日本TaKaRa公司提供；
提取总RNA的TRIzol试剂由美国Promega公司提供；
电泳用琼脂糖由沈阳联星生物公司提供。
三、方法
1．采取Tmzol一步抽提法提取总RNA。
2．逆转录合成cDNA。
3．PCR扩增：
KDR引物序列如下：
TGGTGTAACCCGGA一3’
P1 5’一TATATA
TGG一3’
GAGACAGCT
P25’一rrrGTCACT
扩增片断大小为555bp。
内参照B—actin引物序列如下：
CCAC一3’
GTCGTA
CTG
P1 5’一TGTATGCCT
G一3’
TTG TCAGGA
TAC CGC
P25’一ACAGAG
扩增片断大小为690bp。
PCR扩增时间：预变性95c1290s，变性94℃45s，退火59％45s，
复性72％90s，循环35次后72。C延伸10rain。
4．电泳：PCR扩增产物在2％琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下拍
照，在KODAK电泳凝胶成像及自动分析系统摄像、打印并检测各
扩增带的产物含量。
5．结果判定：在电泳PCR产物中出现555bp的分子条带及内
参照B—actin690bp分子条带为阳性结果，如仅出现内参照p—
mRNA的相对含量通过电
acfin690bp分子条带为阴性结果。KDR
mR一
泳后条带密度与内参照密度比值进行计算，计算公式为：K
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