抑制素α亚基在大鼠体内免疫组化定位.pdfVIP

http :// 抑制素α亚基在大鼠体内的免疫组化定位 张中霞，李莲，徐璐，闫玉琴，王根林 南京农业大学动物科技学院 (210095) E-mail ( genlinwang@) 摘要：用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶 (Strept Avidin-B iotin-Peroxidase Complex， SABC)免疫组织化学方法，以抑制素α亚基单克隆抗体对正常雌性性成熟大鼠各组织的抑制 素α亚基进行定位观察，结果显示：⑴大鼠心脏、肾、脾、淋巴、肾上腺、胰腺均呈阳性反 应，表明存在抑制素α亚基；下丘脑、垂体、肝脏和肺组织呈阴性反应，表明其不存在抑制 素α亚基；⑵与去卵巢大鼠相比,外源注射抑制素α （1～32）片段的大鼠其下丘脑和垂体出 现阳性反应，说明抑制素α亚基能通过血脑屏障。 关键词：抑制素,抑制素α片段,免疫组化定位 1．引言 抑制素（inhibin ，INH ）由α和β两个亚单位组成的二聚体，相对分子质量是32 000 ， 它是TGFp 家族成员，具有具有选择性抑制垂体FSH 的产生和分泌、以及旁分泌和自分泌 作用。单个α亚基虽然没有抑制素生物活性，但可抑制FSH 与其受体结合[1] 。INHα通常被 认为存在于睾丸的 Sertoli 细胞和卵巢的粒层细胞中。有研究者发现其尚可表达于性腺外组 [2] 织，如人类、兔和大鼠的胎盘 （Noguchi ，1997 ） ，人类精液及动物的胃液，垂体、骨髓 [3] 和中枢神经系统 （Meunier et al.1988） 。目前的研究说明，虽然性腺是INH 来源的主要部 位，但INH 还很可能存在较为广泛的性腺外来源，鉴此，本研究通过免疫组化法进行INHα 在大鼠体内各器官组织中的定位，进一步阐明 INH 的分泌来源，并为探讨其通过旁分泌或 自分泌影响靶器官各种生理功能的机制，以及开展相关疾病的基础和临床研究提供可靠依 据。 2．材料与方法 2.1 试验动物 正常雌性性成熟SD 大白鼠30 只，购自南京青龙山实验动物场。 2.2 试剂与材料 抑制素α亚基（1～32）片段（sigma 公司，批号：I8641），抑制素α亚基单克隆抗体 （sigma 公司，批号：I2777）；SABC 免疫组化染色试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司， 批号 SA102100 ），包括正常山羊血清封闭液、生物素化羊抗小鼠 IgG 、SABC （Strept Avidin-Biotin-Peroxidase Complex ，链酶亲和素—过氧化物酶复合物）、复合消化液、 1 本课题得到教育部博士基金（项目编号：20010307007 ）资助 - 1 - http :// 抗原修复液；3,3’-二甲基联苯胺（3,3’-diamino-benzidine ，DAB）、显色试剂盒 （武汉 博士德生物工程有限公司，批号 AR1022）、粘片剂多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine) (武汉博士 德生物工程有限公司，批号AR0001 )、中性树胶（上海标本模型厂产品） 2.3 方法 2.3.1 动物处理 正常性成熟雌性SD 大鼠30 只，在20～22℃室内饲养，自由饮水与采食。处理如下： 20 只大鼠去卵巢，10 只大鼠假摘，饲养1 周后，分为3 组，第一组为对照组（未去卵巢）， 第二组（10 只）去卵巢后分别腹腔注射INH α片段2 μg,1 μg, 0.5 μg，第三组（10 只）去卵 巢后注射生理盐水 （作为第二组的阴性对照），两组在注射后6h 与对照组大鼠一起处死，取 其下丘脑、垂体、心脏、肾、脾、颈部淋巴结、肾上腺、胰腺、肝脏及肺。此外，在各组内 分别设阴性对照即在免疫组化染色过程中以正常小鼠血清替代一抗。 2.3.2 石蜡切片的制作 将取出的组织立即固定于 10%中性甲醛中、脱水、透明、透蜡、包