赖型钩端螺旋体017株外膜蛋白LipL32基因克隆、表达及其细胞毒性研究.pdfVIP

赖型钩端螺旋体017 株外膜蛋白LipL32 基因的克隆、 表达及其细胞毒性的研究* △ 黄毕，鲍朗 ，钟琪，商正玲，张会东，王中平 四川大学华西基础医学与法医学院，成都（610041 ） E-mail ：baolang@ 摘 要：目的 克隆、表达LipL32 基因并研究其细胞毒性。方法 从钩体017 株全基因组中 用PCR 方法扩增出目的基因，双酶切构建重组质粒，转化大肠杆菌，诱导表达LipL32 ，将 表达的目的蛋白免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体，Western blotting 鉴定其免疫原性。将 目的蛋白纯化、复性后作用于ECV304 细胞，通过检测细胞的乳酸脱氢酶（LDH ）、一氧化 氮（NO ）释放量研究其细胞毒性。结果 扩增出816bp 的LipL32 基因，重组质粒经双酶切、 PCR 鉴定、测序结果表明重组载体构建成功。经IPTG 诱导表达的融合蛋白约52KD,主要以 包涵体的形式表达，经免疫动物制备得到多克隆