人参皂甙Rh2致MCF7ADM凋亡和逆转MCF7ADM多药耐药性的基础.docVIP

人参皂贰Rh2致MCF一7/ADM凋亡和逆转MCF一7/ADM多药耐药性的基础研究 摘要 第一部分:乳腺癌耐药细胞株体外模型的建立及其耐药机理研究 肿瘤细胞的多药耐药性 (Multidrugresistanee，MDR)是指肿瘤细胞接触一种抗癌药物产生耐药的同时，对其它结构和作用机理不同的抗癌药物亦产生交叉耐药。MDR的原因是复杂的，但MDRI基因过度表达产生的p一糖蛋白 (permeabilityglyeoprotein，p一gp)是MnR产生的最重要原因。本实验拟针对P一gP介导的多药耐药现象，建立人乳腺癌细胞系MCF一7 的耐药细胞株，以便为探讨乳腺癌细胞MDR的发生机制，并探寻逆转MDR的有效方法和药物提供理想的体外实验模型。方法:通过阿霉素浓度梯度诱导法逐步培养出MCF一7的耐药细胞株MCF一7/ADM。MTT法测定并比较阿霉素(ADM)对MCF一7细胞和MCF一 7/ADM细胞的ICS。;通过罗丹明123滞留实验比较MCF一7细胞和MCF一7/ADM细胞内罗丹明123荧光强度的差别;RT-PCR和流式细胞仪比较MCF一7细胞和MCF一 7/ADM细胞内 mdrlmRNA表达及P一gp表达的不同。结果:历时6个月，成功培养出MCF一7的耐药细胞株MCF一 7/ADM。 MCF一 7/ADM细胞的 ADMICS。为 65.43士 3.94pM，显著高于MCF一7细胞的 ADMICS。一 1.12士 0.14pM(P0.05)，两者相差约58倍;培养体系中加入等量罗丹明123，MCF一7lADM细胞罗丹明123荧光强度为(1.22士0.20)%，显著低于MCF一7细胞罗丹明123荧光强度(97.67土1.01)%(P0，05)，两者相差约80倍;RT.PCR法显示出MCF一 7/ADM细胞内 mdrlmRNA高表达，MCF一7细胞内 mdrimRNA没有表达;流式细胞仪测定MCF一7lADM细胞内P一gp表达为99.80%，而MCF一7细胞内P一gP表达为53.70%，两者相比有显著差异。结论:MCF一7/ADM细胞具有典型的MDR现象，其产生MDR的机制主要为MDRI基因过度表达，导致P一gP过度表达，从而使细胞内药物浓度减少。此耐药细胞株的建立为进一步研究肿瘤细胞多药耐药的发生机制和研究逆转耐药方法提供了理想的实验工具。 关键词:MCF一7细胞系，多药耐药，MDRI基因，P一糖蛋白 第二部分: 人参皂贰RhZ对MCF一7及MCF一7/ADM的抑制作用研究 目的:近年来，人们逐渐认识到促进肿瘤细胞的凋亡是恶性肿瘤治疗的新目标。大量研究表明，单味中药的有效成分及复方制剂在诱导肿瘤细胞凋亡中可以起重要作用。人参(PanaxginsengC.A)为五加科多年生草本植物，其成分具有诸多生物活性，人参皂试助2是由人参中提取的天然活性成分。大量研究证明RhZ具有非常显著的抗肿瘤作用，其抗肿瘤药理作用值得深入的研究。本研究拟以人乳腺癌细胞系MCF一7为受试对象，旨在研究Rh2在抑制MCF一7和MCF一7/ADM细胞增殖方面的作用及机理。方法:不同浓度Rh:分别作用于MCF一7及MCF一7/ADM细胞，应用MTT法确定各组细胞在24小时、48小时和72小时三个时间点的增殖抑制率;通过流式细胞仪检测RhZ对MCF一7及MCF一 7/ADM细胞坏死、凋亡和细胞周期的影响;并检测RhZ对MCF一7及MCF一7/ADM细胞easpase3活性的影响。结果:5~80pmol/LRhZ可以显著抑制MCF一7和MCF一7/ADM的增殖(P0.05)，并有时间和剂量依赖关系;Rh:浓度 80pInol/L后细胞抑制率则不再随灿:浓度增加而上升;RhZ对MCF一7细胞的抑制作用更强。40pmol/L助2主要通过导致MCF一7细胞坏死而抑制其增殖，坏死率为(31.9士2.55)%，凋亡率为(11.33士0.66)%，(P0.05);而相同浓度灿2作用于MCF一 7/ADM细胞，则主要是通过Caspases途径诱导其凋亡，坏死率(7.28士0.20)%，而凋亡率达(26.49士2.42)%，(P0.05)。RhZ对两种细胞周期的影响也有所不同:灿2使MCF一7细胞周期阻滞于S期，GZ/M期细胞减少;而在MCF一 7/ADM细胞中，变化却相反，RhZ导致S期细胞减少，GZ/M期细胞增多。结论:人参皂贰Rh:通过不同机制抑制了MCF一7和MCF一 7/ADM细胞的增殖:RhZ主要通过导致MCF一7细胞坏死而抑制其增殖;而对于MCF一7从DM细胞，则主要是通过Caspases途径诱导其凋亡。助:诱导耐药细胞系MCF一7/ADM凋亡的研究结果显示其在抗肿瘤作用方面的独特性。 关键词:人参皂贰RhZ，MCF一7细胞系，凋亡，坏死，细胞周期 第三部分: 人参皂贰R