鱼类胰蛋白酶与研究进展.pdfVIP

鱼类胰蛋白酶的研究进展1 1，2 2 2 1 1 阮国良 ，李 杨 ，王卫民 ，杨代勤 ，柯玉清 1 长江大学动物科学学院，荆州(434025) 2 华中农业大学水产学院，武汉(430070) E-mail: ruanguoliang@126.com 摘 要: 胰蛋白酶是仔鱼重要的蛋白水解酶，在蛋白消化水解和利用中发挥着关键作用。深 入研究鱼类胰蛋白酶的发生及其调节对于研究早期发育阶段鱼类的消化营养生理及研发替 代仔稚鱼活饵料的人工饲料具有重要理论与实践意义。本文综述了胰蛋白酶生成、催化机制 以及鱼类胰蛋白酶的生化特征、基因克隆、个体发生及表达调控等。鱼类胰蛋白酶的发生变 化表现出规律性的同时更多地存在种类和食性的差异性，故可采用经典实验技术与现代生物 技术相结合的方式，对不同鱼类胰蛋白酶的发生以及饲料、胃肠激素、水温等因子对胰蛋白 酶的表达调控等进行比较研究。 关键词：鱼类；胰蛋白酶；基因表达 中图分类号：S91 1. 导 言 鱼类的消化和吸收受种类、食性、食物来源和生活环境等因素的影响，其生理机制表现 出复杂性和多样性。从酶学和分子水平上确定鱼类其消化潜力、消化酶的时空表达规律及其 调节机制，不仅对于鱼类消化生理和发育生物学的研究具有重大的理论意义，而且为鱼类配 合饲料开发提供理论支持。 胰蛋白酶与糜蛋白酶、弹性蛋白酶等同属于丝氨酸蛋白酶家族，它们具有相似的蛋白水 解催化机制[1-2] [3] ，共同负责对食物蛋白质的水解 。胰蛋白酶广泛存在于鱼类的幽门盲囊、 肝胰脏、肠道，在蛋白消化中发挥着关键作用，它可以迅速地激活胰腺分泌的胰蛋白酶原自 身和其他酶原，如糜蛋白酶原、羧肽酶原、弹性蛋白酶原，从而行使消化功能[4-6] 。在一些 硬骨鱼类的仔鱼发育阶段，胃蛋白酶原的合成起始于仔鱼向稚鱼转换的阶段，当胃腺尚未形 成时，鱼类消化道中缺乏胃蛋白酶原的合成及胃蛋白酶活性，因此，这些鱼类在仔鱼阶段对 食物的胞外消化主要依赖于胰腺酶类[2, 7] 。研究表明，胰蛋白酶是金头鲷（Sparus aurata ） 消化道中最最丰富的蛋白水解酶之一，在蛋白质的水解和利用中发挥着重要作用[8] 。因此， 胰蛋白酶是鱼类早期发育阶段一种重要的蛋白水解酶，深入研究其发生、变化及表达调控等 对早期鱼类营养生理极具价值，如在研发替代仔稚鱼活饵料的人工饲料方面具有重要的实践 意义。 2. 胰蛋白酶的生成与催化机制 胰蛋白酶原(Trypsinogen)是胰蛋白酶未被激活的前体形式。在脊椎动物中，由胰脏的腺 泡细胞粗面内质网上的核糖体产生胰蛋白酶原前体(Pretrypsinogen)，其在N-末端包含一个约 1本课题得到湖北省教育厅重点科研项目（D200512007 ）和国家“十一五”科技支撑计划项 目（2006BAD03B07 、2006BAK02A22 ）资助。 - 1 - 15个氨基酸的信号肽序列和一个6-8个氨基酸的激活肽(Trypsinogen activation peptide，TAP) 序列。信号肽序列是初生肽链胰蛋白酶原前体进入内质网所必需的，其在胰蛋白酶原前体进 入内质网腔之前被与内质网膜结合的信号肽酶（Membrane bound signal-peptidase ）切除[9] （Psochiou, et al., 2007 ），成为胰蛋白酶原。此后胰蛋白酶原被运输到高尔基体，再进入胰 腺运输管，最后释放到肠腔，在那里被肠粘膜细胞分泌的肠肽酶（Enteropeptidase ）（或称 为肠激酶，Enterokinase ）水解掉TAP ，从而生成有催化活性的胰蛋白酶(Trypsin EC)[10] 。 作为丝氨酸蛋白酶家族成员之一，胰蛋