Beta-微管蛋白ⅢASODN对Ec9706_P-1细胞凋亡影响.pdfVIP

第 29卷 第 3期 河南 大学学报 (医学版) Vo1．29 No．3 2O10年 8月 JournalofHenanUniversity (MedicalScience) Aug．2010 Beta一微管蛋 白11IASODN对 Ec9706／P一1细胞凋亡的影响 卢 红 (河南大e-淮河医院 肿瘤科 ，河南 开封 475000) 摘 要 ：目的：观察 B一微管蛋 白ili(口一TubulinIli，TUBB3)反义寡核苷酸 (Antisenseoligonucleotide，AS0DN)对 Ec9706／P一1细胞 凋亡的影响 。方 法：以体 外诱 导的人食 管癌 紫杉醇耐 药细胞株 Ec9706／P一1为模型 ，设 AS0DN组 和无关序列寡核苷酸 (Nonsenseoligonuckotide，NSODN)组，应用免疫细胞化学方法检测 NF~Bppabp65、Bcl一2和 Caspase-3蛋白的表达；采用逆转录 多聚酶链反应 (RIPCR)检测 NF-~Bppabp65、bel一2和 caspase一3mRNA 的表 达；采用 DNA凝胶电泳和吖啶橙 荧光 染 色法检 测 细胞凋 亡 变化 。结果 ：免疫 细胞化 学方 法显示 AS()DN组 NF- KBppabp65蛋 白表达率与 NS()DN组 比较差异无统计学意义 (P0．05)，ASODN组 Bcl一2蛋 白表达率与 NSODN 组 比较差异有统计学意义(P0．05)，ASODN组 Caspase3蛋 白表达率与 NSODN组比较 ，差异有统计学意义(P 0．05)；RT—PCR法显示 As()DN 组 caspase一3mRNA条 带亮度强于 NS()DN组，bcl一2mRNA条带 亮度低 于 NSODN组 ，ASODN组NF~：BppabmRNA条带亮度与 NSODN组相近 ；DNA凝胶 电泳显示紫杉醇作用后 ASOlDN 组有凋亡特征 的DNA 改变，而 NS()DN组细胞却未 出现 ；吖啶橙荧光染色法表 明As()DN组凋亡率与 NSODN组 比较 ，差异有统计学意义 (P％0．05)。结论 ：TUBB3反 义寡核苷酸增加 了紫衫 醇对 Ec9706／ 1细胞 的诱 导凋亡能 力，证明了Bcl-2和 Caspase一3的表达变化很可能是产生紫杉醇耐药的主要机制之一 。 关键词 ：13-微管蛋白11I；食管癌 ；耐药；凋亡 中图分类号 ：R735．1 文献标识码 ：A 文章编号：1672—7606(2010)03—0164—06 Effect0fp—tubulin [1Iantisense0lig0nucle0tidesonEc9706／P一1cellsap— optosis Iu Hong rDepartmentofOntology，Huaihe，2ospitaloJHenanUniversity，Kaifeng，Henan475000，China) Abstract：Objective： To investigatetheeffectofl?-tubulin111antisenseoligonucleotidesonEc9706／P1cellsapoptosis， studytheexpressionofNF ~Bppabp65、Bcl2andCaspase-3，andtoinvestigatethepossiblemechanism ofacquiredresistance ofPaclitaxel—resistanthumanesophagealcarcinomacelllineEc9706／P1Methods： Therewere2groupsinthisstudy： antisenseoligonuc1eotides(AS()DN)groupando1igodeoxynucleotides(NSODN)group．Immunohistochemistryassaywas performedtodetecttheexpressionofBcl2protein，caspase-3protei