β淀粉样前体蛋白裂解酶特异性小干扰RNA真核表达载体构建和鉴定_百替生物.pdfVIP

β淀粉样前体蛋白裂解酶特异性小干扰RNA 真核表达载体的构建和鉴定 作者：董炜疆，胡海涛，冯改丰，杨广笑，王全颖 【关键词】干扰性小RNA 摘要：目的 构建β 淀粉样前体蛋白裂解酶(BACE)特异性小干扰RNA 真核表达载体。方法 用 PCR 扩增BACE 特异性小干扰RNA，转入带有增强型绿荧光蛋白(EGFP)和启动子U6 的pUC19 质 粒，再将重组基因片段导入逆转录病毒真核表达载体pLXSN 中，通过限制性酶切对该重组表达载体 进行鉴定。结果 成功构建了BACE 真核表达载体pLXSN/EGFPU6siBACE。结论 pLXSN/EGFPU6siBACE 载体的成功构建对进一步利用基因干扰技术治疗阿尔茨海默病的研究奠定了 重要的基础。 关键词：干扰性小RNA；阿尔茨海默病；β 淀粉样蛋白分泌酶 Construction and identification of eukaryotic expression vector of small interfering RNA specific for BACE Dong Weijiang, Hu Haitao, Feng Gaifeng, Yang Guangxiao, Wang Quanying (1. Department of Anatomy and Histology Embryology, Medical School of Xian Jiaotong University, Xian 710061; 2. Xian Huaguang Biological Engenier Ld Company, Xian 710065, China) ABSTRACT ：Objective To construct eukaryotic expression vector of siRNA specific for βsite APP cleaving enzyme(BACE). Methods The BACE targeting siRNA gene was amplified with PCR. The PCR product was inserted into the pUC19/EGFPU6 plasmid. Then the pUC19/EGFPU6siBACE was digested with restriction enzyme, and the retrieved EGFPU6siBACE fragment was subcloned into retrovirus shuttle plasmid pLXSN. Which was then named pLXSN/EGFPU6siBACE. Results The eukaryotic expression vector of small interfering RNA(siRNA) specific for βsite APP cleaving enzyme was successfully constructed. Conclusion Construction of the siRNA targeting βsite APP cleaving enzyme lays the important foundation for using siRNA to prevent the Alzheimers disease. KEY WORDS: siRNA; the Alzheimers disease; βsite APP cleaving enzyme 阿尔茨海默病(Alzheimers disease, AD) 是严重的中枢神经系统疾病之一,患者由于神经细胞的大 量死亡而逐渐出现记忆能力、语言能力和知觉能力全面下降,最终会因脑衰竭而死亡。老年斑(senile plaque, SP) 是阿尔茨海默病的主要病理特征之一。淀粉级联学说认为老年斑的核心成分β 淀粉样肽 (βamyloid peptide, Aβ)是AD 发生的主要原因 [1]。Aβ 是淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP) 经β 淀粉样前体蛋白裂解酶(βsite APP cleaving enzyme, BACE)和γ 分泌酶裂解产生的。目前 减少Aβ 产生的许多方法中，最便捷的就是直接抑制BACE 来减少Aβ 的生成。因此，抑制BACE 成 为设计治疗AD 药物的重要靶标，受到人们的广泛关注。 RNA 干扰(RNA inte