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第八章 糖类药物制备原理 第一节 概 述 糖类广布于生物体中，可分为单糖、低聚糖和多糖，已发现不少糖类物质及其衍生物具有很高药用价值，有些已在临床广泛应用。 多糖类药物近来很引人注目，尤其在抗凝、降血脂、提高机体免疫和抗肿瘤、抗辐射方面都具有显著药理作用与疗效。 如PS-K多糖和香菇多糖对小鼠S180瘤株有明显抑制作用，已作为免疫型抗肿瘤药物，猪苓多糖能促进抗体的形成，是一种良好免疫调节剂，还有茯苓多糖、云芝多糖、银耳多糖、胎盘脂多糖等都已在临床上应用。肝素是天然抗凝剂，用于防治血栓、周围血管病、心绞痛、充血性心力衰竭与肿瘤的辅助治疗。硫酸软骨素有利尿、解毒、镇痛作用。右旋糖酐可以代替血浆蛋白以维持血液渗透压，中分子量右旋糖酐用于增加血容量，维持血压，以抗休克为主；低分子量右旋糖酐主要用于改善微循环，降低血液粘度；小分子量右旋糖酐是一种安全有效的血浆扩充剂。海藻酸钠能增加血容量，使血压恢复正常。 多糖是非细胞毒物质，在细胞内的存在方式有游离型与结合型两种。结合型多糖有与蛋白质结合在一起的糖蛋白和与脂类结合在一起的脂多糖。前者如黄芪多糖、人参多糖和刺五加多糖，后者如胎盘脂多糖和细菌脂多糖。糖基在糖蛋白分子中的作用有的与生理活性有关，有的与抗原性有关，还有的与细胞“识别”功能有关。 一、单糖及其衍生物的制备 游离单糖及小分子寡糖易溶于冷水及温乙醇，如葡萄糖、果糖、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、双糖类如蔗糖、麦芽糖，三糖类如棉籽糖、龙胆糖，四糖类如来苏糖，以及多元醇类，如卫矛醇、甘露醇等。 可以用水或在中性条件下以50%乙醇为提取溶剂，也可以用82%乙醇，在70~78℃下回流提取。溶剂用量一般为材料的20倍，需多次提取。植物材料磨碎经乙醚或石油醚脱脂，拌加碳酸钙，以50%乙醇温浸，浸液合并，于40~45℃减压浓缩至适当体积，用中性醋酸铅去杂蛋白及其他杂质，铅离子可用H2S除去，再浓缩至粘稠状。以甲醇或乙醇温浸，去除不溶物如无机盐或残留蛋白质等。醇液经活性炭脱色、浓缩、冷却、滴加乙醚，或置于硫酸干燥器中旋转，析出结晶。单糖或小分子寡糖也可以在提取后，用吸附层析法或离子交换法进行纯化。 二、多糖的分离与纯化 多糖可来自动物、植物和微生物。来源不同，提取分离方法也不同。植物体内含有水解多糖衍生物的酶，必须抑制或破坏酶的作用后，才能制取天然存在形式的多糖。供提取多糖的材料必须新鲜或及时干燥保存，不宜久受高温，以免破坏其原有形式，或因温度升高，使多糖受到内原酶的作用。速冻冷藏是保存提取多糖材料的有效方法。 提取方法依照不同种类的多糖的溶解性质而定。如昆布多糖、果聚糖、糖原易溶于水；壳多糖与纤维素溶于浓酸；直链淀粉易溶于稀碱；酸性粘多糖常含有氨基已糖、已糖醛酸以及硫酸基等多种结构成分，且常与蛋白质结合在一起，提取分离时，通常先用蛋白酶或浓碱、浓中性盐解离蛋白质与糖的结合键后，用水提取，再将水提取液减压浓缩，以乙醇或十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)沉淀酸性多糖，最后用离子交换色谱进一步纯化。 (一)多糖的提取 提取多糖时，一般先需进行脱脂，以便多糖释放。方法是将材料粉碎，用甲醇或1：1乙醇乙醚混合液，加热搅拌1~3h，也可用石油醚脱脂。动物材料可用丙酮脱脂、脱水处理。 多糖的提取方法主要有以下几种。 1.难溶于冷水、热水，可溶于稀碱液者 这一类多糖主要是不溶性胶类，如木聚糖、半乳聚糖等。用冷水浸润材料后用0.5mol/L NaOH提取，提取液用盐酸中和、浓缩后，加乙醇沉淀得多糖。如在稀碱中仍不易溶出者，可加入硼砂，对甘露聚糖、半乳聚糖等能形成硼酸络合物的多糖，此法可得相当纯的物质。 2.易溶于温水、难溶于冷水和乙醇者 材料用冷水浸过，用热水提取，必要时可加热至80~90℃搅拌提取，提取液用正丁醇与氯仿混合液除去杂蛋白(或用三氯乙酸除杂蛋白)，离心除去杂蛋白后的清液，透析后用乙醇沉淀得多糖。 3.粘多糖 有些粘多糖可用水或盐溶液直接提取，但因大部分粘多糖与蛋白质结合于细胞中，因此需用酶解法或碱解法使糖—蛋白质问的结合键断裂，促使多糖释放。碱解法可以防止粘多糖分子中硫酸基的水解破坏，也可以同时用酶解法处理组织。提取液中的残留蛋白可以用蛋白质沉淀剂或吸附剂如硫酸铝、藻土等除去。 一般组织中存在多种粘多糖。纯化时，需要对粘多糖进行分离纯化。可利用各种粘多糖在乙醇中溶解度的不同，以乙醇分级沉淀法进行纯化分离；或利用粘多糖聚阴离子电荷密度的不同，用季胺盐络合物法，阴离子交换层析法和电泳法进行分离，纯化。 (1)碱解法 多糖与蛋白质结合的糖肽键对碱不稳定，故可用碱解法使糖与蛋白质分开。碱处理时，可将组织在40℃以下，用0.5mol/L NaOH溶液提取，提取液以酸中和，透析后，以高岭土、硅酸铝或其他吸附剂除去杂蛋白，再用酒