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科学研究 纛 篱器 第202098卷年第66月期
53
枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转胺酶基因的克隆
及在大肠杆菌中的表达
李秀星 。戚薇 ，王建玲
(天津科技大学 生物工程学院，天津市工业微生物重点实验室，天津 300457)
摘 要：以枯草芽孢杆菌DB104染色体DNA为模板，利用PCR技术扩增得到谷氨酰胺转胺酶基因tg，将其克隆至
大肠杆菌质粒pET一22b(+)中，构建表达载体pET—tg，并转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经IPTG(异丙基B—D一硫代
半乳糖苷)诱导，SDS—PAGE电泳分析，结果表明谷氨酰胺转胺酶得到 了表达，表达量 占菌体总蛋白的l2％。诱导菌
体经裂解后的上清与酪蛋白反应，显示其具有交联蛋白质的活性。经荧光法测定，诱导5h的菌体酶活为 1590U／g
(DCW，cellweight，细胞干重)，是 出发菌株30U／g(DCW)的52倍。
关键词：谷氨酰胺转胺酶；枯草芽孢杆菌；大肠杆菌；克隆；表达
CL0NINGANDEXPRESSINGOFTRANSGLUTAMINASEGENEINECD ，
LIXiu-xing，Q1wei，WANGJian-ling
(TianjinKeyLabofIndustrialMicrobiology，CollegeofBiotechnoloyg，TianjinUniversity
ofScienceTechnology，Tianiin300457，China)
Abstract：Thegenetgencodingtransglutaminasewasamplifiedfrom genomicDNAofBacillussubtilisDB104
byPCR，andinsertedintovectorpET-22b(+)toconstructexpressionplasmidpET—tg．rrherecombinantplasmid
wasthentransformedintoEcoliBL21fDE3)．SDS—PAGEanalysisrevealedthattransglutaminasewasexpressed。
andtheexpressionaccountfor12％ ofthetotalcellprotein．Thecellsupernatantdemonstrateditscrosslinking
activitybyreactedwithcasein．Theenzymeactivitymeasuredwiththemethodoffluorescencereached2．13U／g
(DCW)。whichwas52foldsastheDB104．
Keywords：transglutaminase；Bacillus subtilis；Escherichiacoli；cloning；expression
作者简介：李秀星(1985一)，男(汉)，硕士，主要从事工业微生物育种方面的研究。
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氧水处理水中农药的降解率相比较高 这是由于臭氧 西院学报，2000，8(3)：54—58
水浓度的提高增加了对农药的降解率。这与龚勇嗍用臭 GrahamDM．Useofo
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