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一种高通量SNPs检测芯片制备条件的优化及应用.pdf
SNPs
*
(210096)
E-mail nyhe1958@163.com
SNP c
dd
PCR d
350µg/ml 400mJ
SNP PCR
O 657
1.
single-nuleotide polymorphism
1%[1, 2] SNP
SNP 200
SNP ,
, [3]
SNP(allele-specific
oligonucleotide hybridization , ASO) (mismatch amplification mutation
assay , MAMA) dynamic allele-specific hybridization , DASH
(denaturing high performance liquid chromatography., DHPLC)
(denaturing gradient gel electrophoresis ,TGGE) (single-strand
conformational polymorphism ,SSPC) Invader
[4] SNP
[5]SNP
DNASNP
PCR Cy3Cy5
SNP[6]
PCR
2.
2.1
Pixsys 5500 Cartician Tech
1 200502860 14
- 1 -
ScanArray Lite BioScience (BLX-254 Vilbur Lourmat
); PTC-225 MJ Research (BioMate 3
Themro Spectronic )
25%
Cy3Cy5
.
2.2
2.2.1
6 ml poly-l-lysine 7 ml 1 hPBS 57 ml
1 h
3 5 min 50 10-30 min
2.2.2
=11 30 min,
30 min 95%2 %3-
APTES -95 %10 min
2.2.3
0.0 1 M PB 5%
Glutaraldehyde 2 h 0.01 M PB
2.2.4 PCR
PCR polymerase chain reaction 200 g/ml DNA
1 l 10 M the methylenetetrahydrofolate reductaseMTHFR
C677T 1 l10 h3 l25 mM Mg2+2 l10 mM dNTP
0.6 l, 1 mM Cy3-dCTP 0.5l1.25 U Taq DNA 5U/l 30 l
95 5 min 95 30 s 60 30 s7230 s, 30 , 72 5 min
PCR QIAquick PCR
Purification Kit (50) PCR 3 hSSC
2.2.5 PCR
PCR 384 Pixsys 7500
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