光合细菌嗜酸柏拉红菌5-氨基乙酰丙酸合成酶基因克隆与原核表达.pdfVIP

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2017-08-31 发布于安徽
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光合细菌嗜酸柏拉红菌5-氨基乙酰丙酸合成酶基因克隆与原核表达.pdf

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卷期 ! ! 微生物学报 !（）： ! ’( ) !! 年月日 #$$ % ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! *+,+-. #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 光合细菌嗜酸柏拉红菌氨基乙酰丙酸合成酶 ! 基因的克隆与原核表达 1 1 1 # 1 张德咏，成飞雪，程菊娥，张战泓，刘勇 1 （湖南省植物保护研究所长沙 !1$1#H ） # 湖南省蔬菜研究所长沙）（ !1$1#H 摘要：氨基乙酰丙酸（）可作为除草剂、杀虫剂和植物生长调节剂在农业上应用，但由于其成本较高而限制 H6 *I* 了它的大面积使用。利用常规基因工程操作方法结合载体介导法（）克隆了嗜酸柏拉红菌 JKL M4A.4N4..4 JKL （）的氨基乙酰丙酸合成酶（）基因。并将编码的基因插入到原核表达载体 !#$#%’()*( ’+,$#-,*( H6 *I*O *I*O PQ:’$ 中，在大肠杆菌不同菌株（、及（））中进行诱导表达。对产物进行分析表明， . G +#, RS1$( S1H /I#1 0:’ O0O6J*T: *I*O 基因已在细菌中成功表达。使用U6U3* 亲和层析法对表达的*I*O 进行分离、纯化，得到大小约为!!V0 的蛋白。通过优化工程菌株的培养条件，建立了发酵生产的方法，其胞外分泌产量达， *I*O *I* *I* H @’(,W I *I*O 酶活力高达’’’XW;F G ;,。这是目前国内外利用生物法生产*I* 产量最高的报道，为*I* 的产业化应用打下了良好的基础。关键词：嗜酸柏拉红菌；基因；载体介导；原核表达 *I*O JKL 中图分类号：文献标识码：文章编号：（） Q(’ * $$$16#$( #$$ $!6$’(6$ 氨基乙酰丙酸（