烟草PVYReal—TimePCR定量检测体系的建立及应用.pdfVIP

中国烟草科学 2010，31(1)：9-12 9 烟草 PVYReal—TimePeR定量检测体系的建立及应用 刘晓霞 ，一，杨金广 ，王凤龙 ，钱玉梅 ，申莉莉 ，张 帅 一，王长栓 。，黄 瑾 。 (1．国家烟草专卖局烟草病虫害监测与综合治理重点开放实验室，中国农业科学院烟草研究所，青岛 266101；2．中国农业 科学院研究生院，北京 100081；3．广西壮族 自治区烟草公司百色市分公司，广西 百色 533000) 摘 要 ：马铃薯Y病毒是近年来危害烟草生产的重要病毒之一，严重影响烟草的产量与品质。本研究利用DNAMAN软件 对GenBank数据库中已登录的马铃薯Y病毒 (PotatovirusY，PVY)全基因组序列进行序列比对，设计引物，以烟草肌动蛋 白基因为内参，建立了烟草PVY的实时定量检测体系。获得的real—timePeR扩增基线平整，指数扩增明显，斜率大；稳定 性和重现性好，变异系数小；循环闽值与PeR起始模板量对数之间存在 良好的线性关系。与 DAS—ELISA相比，该方法具 有高效、灵敏、特异性强等优点，为从分子生物学水平上检测烟草中PVY提供 了新的技术手段。 关键词 ：Real—timePeR；PVY；检测 中图分类号：$435．72 文章编号：1007—5l19(2010)01—000904 DOI：10．3969~．issn．1007—5119．2010．01．003 EstablishmentandApplicationofReal—timePCRforDetection ofPotatoVirusY inTobacco LIUXiaoxia一，YANGJinguang，WANGFenglong ，QIAYYumei。，SHENLili， ZHANG Shuai，_．WANG Changshuan3 HUANG Jin。 ， (1．KeyLaboratoryofTobaccoPestMonitoring IntegratedManagement，StateTobaccoMonopolyBureau，TobaccoResearch InstituteofCAAS，Qingdao266101，China；2．GraduateSchoolofCAAS，Beijing100081，China；3．BaiseBranch，GuangxiTobacco Corporation，Baise，Guangxi533000，China) Abstract：PotatovirusY(PVY)isoneofthemostimportantviurseswithhugedamagetotobaccoyieldsandqualityinrecentyears． A quantitativemethodusingreal—timePCR techniquebasingonfluorescencedyeSYBR GreenwasemployedtodetectPVY in tobaccointhisstudy．PVY genomesequencealignmentsloggedinGenebankwerena alyzedusingDNAMAN softwrae．Primer5．0 softwraewasusedtodesignspecificprimersofPVY geneandactingene．Resultsshowedhtatthema plificationcurvehadflat baseline，distinctexponentialarea，largeand stableslope，andthecoefficientofvraiationwasverysmal1．Therewasa linera relationshipbetweenthresholdcyclevalueswheresamplescrossedthresholdandthelograithm icvaluesoftemplate