胚胎组织提取液影响表皮干细胞表型变化的初步研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(5)：883—887 · 883 · 【文章编号] 1000—4718(2008)05—0883—05 胚胎组织提取液影响表皮干细胞 表型变化的初步研究 孙晓艳 ，‘ 付小兵 ， 盛志勇 ， 张翠萍 ， 孙 同柱 (解放军总医院基础医学研究所，北京 100853；解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室，北京 100037) [摘 要] 目的：模拟表皮干细胞周围生态微环境，研究表皮干细胞在此环境中的表型变化，表皮干细胞微 环境在表皮干细胞”命运”决定过程中的作用。方法：分离、培养表皮干细胞，观察其形态 ，并进行免疫组织化学鉴 定及免疫荧光检测。制备小 鼠胚胎组织匀浆液，荧光活细胞示踪法和逆转录聚合酶链式反应检测胚胎组织提取液 对表皮干细胞表型变化的影响。结果：原代分离培养的表皮基底层干细胞表达 仅、13。整合素、K19、K14、p63、Nes— tin、PCNA为阳性，而KIO不表达。激光共聚焦检测显示 仅 整合素和CD71在表皮干细胞中的分布存在着区域性 差异。此外，流式细胞检测显示胚胎组织提取液作用后仅 CD71一表达细胞由细胞总数的22，49％减少至 10．92％， 而 CD71、仅 CD71表达细胞则分别由诱导前的62．29％及0．19％增加至诱导后的68．34％及4．51％。RT— PCR结果表明胚胎组织提取液作用后，表皮干细胞中31．整合素、K19、KIO表达增强，而 K14表达减弱。结论：IV 型胶原黏附法分离的表皮干细胞具有干细胞的特点。仅 整合素、CD71在表皮干细胞中分布的区域差异及CD71 表达位点的空间变化可以作为区分表皮干细胞及其子代细胞标志之一。胚胎组织提取液对表皮干细胞的增殖分 化具有促进作用。胚胎组织提取液中的某些因子可能抑制了K14表达的TA细胞的终末分化，甚至诱导其发生逆 向分化，导致诱导后K14的总体表达水平下调。 [关键词] 表皮干细胞；抗体，单克隆；胚胎组织提取液 [中图分类号] R644 [文献标识码] A Embryonictissueextractsmodulatecel1．．fatedetermination in human epidermalstem cells SUN Xiao—yan ，FU Xiao—bing ，SHENG Zhi—yong ，ZHANG Cui—ping ，SUN Tong—zhu (ImktiuteofBasicMedcidScience，ChinesePIAGeneralHospital，Beijing100853，China；BurnsInstitute，TheFirstAf- fit~uedHospitalofChinesePIAGeneralHospital，Beijing100037，China．E—mailO．euxiaobing@vo,．sina．corn) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatethephenotypicchangesandcell—fatedeterminationofkeratinocytestemcells invitro．METHODS：ImprovedcollagenVI —coatedadhesionmethodwasusedtoisolateandculturethekeratinocytestem cellsafterneutron—proteaseselectivelydigestedthedemro—epidemraljunctions．Morphologicalfeaturesandidentification oftheseimmature cellswere studiedbyimmunochemistrynadconofcalmicroscopyna alysis．Aftertreatedwithextractsfrom 14一day—oldmousefetusesattheconcentrationof10％ (W／V