转基因技术研究进展及在动物生产中的应用.pdfVIP

维普资讯 中国奶牛 ·2008年第5期 · 29· 转基因技术研究进展及在动物生产中的应用 王洪才．马巍，王军 (辽宁医学院动物科学技术学院，锦州 121001) 中图分类号 ：$813．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—4264(2008)05—0029—03 摘要：随着新技术的发展和对基因功能的了解，转基因技术获得 了更加广泛的应用。本文综合有关文献资料，主要 介绍生产转基 因动物的程序与方法、鉴定方法及其在动物生产中的应用前景。 关键词 ：转基因；转基因动物 ；载体 ；转染 ；显微注射 ；杂交 转基 因动物技术经过近 3O年 的发展 ，无论在技术 将以上制备 的调控序列和 目标基 因组装到合适 的 的多样性方面还是实用性方面都取得 了显著进步 ，转 质粒载体上 ，然后通过体外扩增 、酶切 、体外重组形成 基因动物的研究对生物科学发展发挥 了重要作用 。本 一 个完整的表达载体 文综合相关文献 ．旨在介绍转基 因动物生产程序和鉴 1．1．3 扩增外源基 因 ‘ 定方法及其研究进展 ，探讨转基因动物在动物生产 中 把组装后载体质粒转化至大肠杆菌 中扩增 ．然后 的应用前景 分离 、纯化重组体 DNA，用适 当的内切酶消化 ，制备成 1 转基因动物生产程序和方法 线状基因片段 ．再将线状和环状重组 DNA分别溶于无 1．1 表达载体的制备 菌生理盐水中，制备成一定浓度 ，贮存备用。 1．1．1 选择 目标基因和载体 1．2 基 因转染方法 在各种核酸酶(切割酶、连接酶、聚合酶和修饰酶) 1．2．1 反转录病毒载体法 作用下 ．将 目标基 因片段连接到合适的载体上 ，形成重 反转录病毒是一种单链 RNA病毒 ．进入细胞后 ， 组脱氧核糖核酸复合体。形成的复合体含有 目标基因、 在反转录酶作用下 ．病毒 RNA反转录为双链 DNA，整 标记基因、选择基 因、启动子以及与受体细胞脱氧核糖 合到细胞核基因组中。因此 ．反转录病毒是天然的转基 核酸结合的酶切位点。目前用于转基因的载体有 ：SV40 因载体系统 无论是完整的还是经遗传工程改造 的反 (SimianVacuolatingVims40)病毒载体 、腺病毒载体 、 转录病毒都可用于转染 Robertson等 (1986)用反转录病 痘病毒载体 、Z载体等 ；标记基因主要有 ：抗药性基 因、 毒法转染 ES细胞获得了转基因小 鼠n【反转录病毒法 胸苷激酶 (TK)基 因、二氢叶酸还原酶基 因等。 是各种基 因转移方法中最有效的方法之一 1．1．2 组装表达载体 这种方法的优点是 ：操作简便 ，无需特别 的仪器设 备 ：整合效率高 ，效果稳定 ，通常外源基因是单拷 贝整 收稿 日期 ：2oo7一ll一13 合到受体基因组中：而且转染不受胚胎发育阶段限制。 作者简介 ：王洪才 (1967一)，男 ，硕士 ，副教授 ，从事动物遗传 育种的教学 缺点是感染宿主时．为非同源整合，结合不稳定，调控 与研究 。 区内可能会发生相互作用 ．所 以应选择能稳定整合表 7U：l271-128