转染Smad7基因的大鼠肾小球系膜细胞对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的改变.pdfVIP

维普资讯 复 里雪搪 (医学版) 436 Fudan Univ J i 2￡u。u。8oMlwaayy,35(3．)) Univ M ed Sc 转染 Smad7基因的大鼠肾小球系膜细胞 对 I、Ⅲ型胶原表达的改变 于 鸿 陈 琦 刘 晔 赵仲华 郭慕依△ (’江苏省泰州市人民医院病理科 江苏泰州 225000； 复旦大学上海医学院病理学系 上海 200032) 【摘要】 目的 探讨 Smad7基因对大鼠肾小球系膜细胞 (MsC)I、Ⅲ型胶原 (ColI、ColHI)表达的影响，为试 图运用 Smad7对肾纤维化进行基因治疗提供实验依据。方法 经脂质体介导将含有Smad7重组表达质粒转 染大鼠MsC，用G418筛选及 Northernblot、Western blot法鉴定；又分别采用 RT-PCR和Westernblot法，检测 转染阳性 MsC克隆ColI、ColHI表达改变。结果 成功建立稳定高表达 Smad7的阳性 MsC克隆(S-22与 26)，并证实两阳性MsC克隆Co lI及Co lHImRNA及蛋 白的表达均被明显抑制，其中S-22克隆 ColI及 Col HImRNA表达分别降低 47 和56 ，其蛋白表达分别降低65 和54 。结论 Smad7可能通过抑制组织内 Co lI及Co lHI的生成而起到减轻肾纤维化进展的作用。 【关键词】 系膜细胞； Smad7； I型胶原； HI型胶原 【中图分类号】 R692．6 【文献标识码】 A ChangesoftypeI，Ⅲ collagenexpressioninculturedratglomerular mesangialcellstransfectde withSmad7cDNA YU Hong，CHENQi，LIU Ye，ZHAO Zhong—hua，GUOMu—yi△ (’DepartmentofPathology，TaizhouPeople’SHospital，Taizhou225000，JiangsuProvince，China； DepartmentofPathology，ShanghaiMedicalCollege，FudanUniversity，Shanghai200032，China) [Abstract] Objective ToinvestigatethechangesoftypeI，II1collagen(ColI，Co lIl1)expressionon culturedratglomerularmesangialcells(MsC)transfectedwithSmad7cDNA inordertoprovideex— perimentalproofsforblockingrenalfibrosiswithSmad7genetherapy． Methods Lipofectinmethod wasusedtotransfectSmad7cDNA intoMsC，andtransfectedcellswereselectedwithG418．Smad7 mRNA andproteinexpressionwasdetectedbyNorthernblotandW esternblotanalysis，respectively． TheexpressionoftypeI，Ⅲ ocllagenonMsCweredeterminedbyreversetranscription-polymerase chainrea