应用全血PCR直接扩增技术检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性.pdfVIP

应用全血PCR直接扩增技术检测亚甲基四氢叶酸还原 酶基因C677T多态性1 1 1 1 2 3 3 3 刘冉 ，尹立红 ，浦跃朴 ，周国华 ，王仪 ，潘恩春 ，杨文洲 1东南大学公共卫生学院, （210009 ） 2 华东医学生物技术研究所, （210002 ） 3 江苏省淮安市疾病预防控制中心, （223001 ） E-mail （lhyin@ ） 摘 要：[ 目的] 了解淮安汉族人群亚甲基四氢叶酸还原酶基因MTHFRC677T多态性及其地理 分布特征，评价全血PCR直接扩增技术在大规模现场人群基因多态性筛检中的应用价值。[方 法] 对 205 例淮安汉族健康个体分别采用全血PCR直接扩增技术和以基因组DNA为模板的 传统PCR-RFLP技术分析MTHFRC677T的基因型分布频率，并与不同地区的汉族人群资料进 行了比较。[结果] 全血PCR直接扩增技术和以基因组DNA为模板的传统PCR-RFLP 法测定 MTHFRC677T遗传多态的分布频率具有高度一致性(Kappa ＝0.946 ，95%CI 0.906~0.985)；传 统PCR-RFLP 法测定淮安汉族人群MTHFRC677T 的基因型频率分别为CC 31.71% 、CT 47.80% 、TT 20.49%；C和T等位基因频率分别为 55.61%和 44.39%；10 个地区的汉族人群 MTHFR677T等位基因频率的趋势性χ2分析表明MTHFR677T的分布随地理纬度的降低T等位 基因频率也降低(P=0.001) 。[结论] 中国汉族人群中MTHFRC677T多态性具有依赖地理纬度的 地区差异，淮安汉族人群基因型的分布特征与纬度 35° ～30°地区一致。全血PCR直接扩增技 术简便易行，适用于人群的疾病基因多态性的快速筛检。 关键词：外周血; 亚甲基四氢叶酸还原酶; 单核苷酸多态; 筛检技术 1. 引 言 亚甲基四氢叶酸还原酶( methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR) 是叶酸代谢中的 关键酶之一，可将还原型辅酶I (NADPH) 相关的5, 10-亚甲基四氢叶酸还原为5- 甲基四氢叶 酸[1] 。前者生物学作用为细胞内一碳基团的传递体，参与嘌呤和嘧啶的合成及DNA修复过程； 此外，5- 甲基四氢叶酸作为甲基供体，在甲硫氨酸合成酶的催化下，同型半胱氨酸接收甲基 基团，生成蛋氨酸，并进一步复甲基化为S-腺苷甲硫氨酸，参与体内广泛的甲基化反应。这 一代谢途径的正常运转在维持DNA正常甲基化和核苷酸从头合成以及DNA修复是至关重要 的[2] 。目前研究发现MTHFR基因在人群中具有多态性, 最常见的突变是C677T，导致高度保 守的丙氨酸突变为缬氨酸，降低黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)与MTHFR结合能力，影响MTHFR 1基金项目: 国家自然科学基金项目(No.; 江苏省预防医学科研基金项目(Y2004025); 东南大学国家自然科学基金预研项目(XJ0525212) - 1 - [3] 的酶活性和热稳定性 ，可能与神经管缺陷、心脑血管疾病和部分癌症发生的遗传易感性有 关。 本研究对随机抽取的江苏淮安 205 例健康体检者采用全血PCR直接扩增技术[18-19]检测 MTHFRC677T的多态性，与报道的我国其他地区的汉族人群MTHFRC677T多态性资料进行比较， 对MTHFRC677T多态与地理位置的关系进行分析，进一步认识MTHFR第 677 位点多态性在中国 汉族人群中的分布特征。同时，对MTHFRC677T多态性检测结果与传统PCR