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糖鎖の効率合成と機能研究：陽電子断層撮影法を利用した新しい糖鎖機能解析法 Synthetic and functional studies of oligosaccharides and glycoconjugates: new functional analysis by using positron emission tomography 代表研究者 大阪大学 深瀬浩一 Osaka University Koichi Fukase 協同研究者 大阪大学 田中克典 Osaka University Katsunori Tanaka Solid phase synthesis of N-linked glycan was developed. Our synthesis features (i) microfluidic α-sialylation and β-mannosylation as well as (ii) the efficient glycosylation of the sugar units on the oxybutane-linked polystyrene resin by virtue of the “reagent concentration effects”using fluorous solvent. A new DOTA (1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid)-labeling probe was designed and synthesized. The high reactivity of the probe enabled the modification of lysine residues in peptides and proteins at very low concentration ( 10-7 M) within a short reaction time. The first PET of glycoproteins, [68Ga]DOTA-orosomucoid and asialoorosomucoid successfully visualized the differences in the circulatory residence of glycoproteins, in the presence or absence of the sialic acids. 研究目的 細胞表層の糖鎖は器官形成、老化、感染、炎症、生体防御、癌化、癌転移など様々な生 命現象に関与していることが明らかにされてきており、現在その機構の詳細な解明が具体 的な研究対象となっている。糖鎖の構造は複雑で多様性と柔軟性に富み、また遺伝子によ って厳密には規定されないことから、糖鎖は特異な生物機能を有することが示唆され、糖 鎖が関わる未知の生物現象が存在する可能性もある。 糖鎖の機能解析には特定の糖鎖が十分な量必要とされるので、糖鎖合成はきわめて重要 である。また診断や治療に有用な糖鎖が見出されたとき、糖鎖誘導体の合成技術は不可欠 のものとなる。N-結合型糖タンパク質糖鎖は、タンパク質の３次構造の形成と維持やタン パク質の血中の安定性に重要な役割を果たしており、免疫系にも作用することが示唆され ている。我々はシアル酸の結合したN-結合型糖タンパク質糖鎖の生物機能を明らかにする ことを目指し、固相法やマイクロ流路合成などの新手法を利用することで糖鎖の効率合成 法について検討した。 さらに生体レベルでの機能解明を目指し、糖関連化合物を中心にした生体分子のイメー ジング研究を行った。 研究経過 N-結合型糖タンパク質糖鎖の合成研究 高立体選択的β-マンノシル化法とα-シアリル化法の開発 β-マンノシド結合やα-シアロシド結合はN-結合型糖タンパク質糖鎖などの部分構造とし て普遍的に存在しているが、これらの化学合成は、立体的にも熱力学的にも不利であるこ とから困難であった。そこで本研究ではまずこれらについて検討した。 シアル酸とはノイラミン酸の種々の誘導体の総称であり、通常糖鎖の非還元末端にαグリ コシドとして存在する。グリコシド結合部位の横の３位炭素はメチレン構造であり隣接基 関与を用いられない、α- シアロシドは相当するβ-シアロシ