垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和产物纯化与鉴定.pdfVIP

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2017-08-30 发布于安徽
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垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和产物纯化与鉴定.pdf

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ISSN 中国生物化学与分子生物学报 2004 年 6 月 CN 　113870Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 20 (3) :376～382 垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和产物纯化与鉴定余榕捷 , 　洪　岸 , 　张　玲 , 　周天鸿 , 　戴　云 , 　高　媛 ( 暨南大学生物工程研究所 , 广州　510632) ( 摘要　为利用基因工程技术获得垂体腺苷酸环化酶激活肽 pituitary adenylate cyclase activating polypeptide ,PACAP) ,根据大肠杆菌的密码偏好性 ,设计并人工合成编码 38 个氨基酸的 PACAP 基因. 克隆到表达载体 pET35b ( + ) ,构建重组质粒 pETPACA P ,转化大肠杆菌 BL21 (DE3) pLysS+ . 实 ( ) ( 现纤维素结合域 cellulose binding domain , CBD 与 PACAP 融合蛋白的表达 ,并在两者之间引入凝 ) ( ) 血因子 Ⅹa 识别位点 IleGluGlyArg ↓. 融合蛋白CBDPACAP 经纤维素亲和层析纯化后 , 因子 Ⅹa ( ) 酶切释放 PACAP. 在因子 Ⅹa 识别位点前引入 7 个氨基酸的柔性短肽 GlyThrGlyGlyGlySerGly 明显提高了融合蛋白对因子 Ⅹa 的敏感性. HPLC 进一步纯化得到纯度大于 95 %PACAP 多肽. 所得的 PACAP 多肽的Western 印迹鉴定为阳性 ;激光飞行质谱测定分子量结果与理论值相符. 生物活性分析表明 ,所制备的 PACAP 具有促进胰腺癌细胞株 SW1990 胞内cAMP 合成的活性. 关键词　垂体腺苷酸环化酶激活肽 , 因子 Ⅹa , 基因合成 ,纯化与鉴定中图分类号　Q786 Gene Synthesis , Expression of Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide and Its Purification and Identification YU Rongjie , HONG An , ZHANGLing , ZHOU Tianhong , DAI Yun , GAO Yuan ( Bioengineering Institute of Jinan University , Guangzhou 　510632 , China)