氯沙坦对应用L-NNA的大鼠Heymann肾炎的肾脏保护作用及机制探讨.pdfVIP

中 文 摘 要 前 言 一氧化氮(NO)对肾脏功能具有重要影响。近年来大量国外 研究表明NO合成酶(nitricoxidesynthase,NOS)抑制剂可引起受 试动物的系统性高血压、蛋白尿及肾脏形态学损害，如肾小球硬 化，肾间质纤维化等，其原因归于肾素血管紧张素(AR)系统的活 性增高，和继之引起细胞因子的激活;阻断血管紧张素II(AngII) 即可阻止上述损害的发生和发展。国内尚未见NOS抑制剂N- 硝基一L一精氨酸(L一NNA)对肾脏影响的相关资料。本文采用 Heymann肾炎模型，研究应用L一NNA阻断NOS后，氯沙坦对正 常大鼠及肾病大鼠的肾脏保护作用并探讨其机制。 (kgi材料 1.动物:雄性Wistar大鼠28只，体重300一350克，周龄10一 12周(用于提取近曲小管刷状缘抗原FX,A);雄性Wistar大鼠48 只，体重180-220克，周龄7-9周(用于实验观察);雄性日本大 耳兔3只，体重约200()克。 2.血管紧张素n检测放射免疫试剂盒，北京中国原子能科学 研究院。 3.TGF一R:免疫组化检测试剂盒，武汉博士德生物技术有限 公司。 4.N，一硝基一L一精氨酸(L一NNA),Sigma公司，批号: 108H1294. 5.氯沙坦，默沙东公司惠赠。 实 验 方 法 1.建立大鼠 肾炎模型:将体重为300一350克的 ·1. Wistar大鼠麻醉开腹，分离双肾，以肝素生理盐水冲洗，低温分离 肾皮质，用组织匀浆机完全匀浆后，经两次离心，提取近曲小管刷 状缘抗原(FX,A)，用等量福氏佐剂完全乳化包被，每周给所选日 本大耳兔免疫一次，共六次，待大耳兔血清效价达1;犯后，经其 颈动脉插管取血，离心后取上清，即兔抗鼠FX,A血清;从预选的 48只体重180一220克的雄性Wistar大鼠中随机抽取24只，按 1ml/l00g剂量将兔抗鼠FX,A血清一次性注人其腹腔内，建立 Heymann肾炎模型，即为肾病组，其余24只注人同等剂量生理盐 水，为正常组。 2.分组:将正常组(1组)及肾病组(2组)的各24只大鼠再随 机分为le,1B,1。和2,2B,2c共6组，A,B,C组干预条件一致，即 A组:对照组，6只;B组:L一NNA组，12只，L一NNA按500mg/1 比例放人饮水中;C组:L一NNA并氯沙坦组，6只，L一NNA按 500m岁1比例放人饮水中，氯沙坦按30m以kg.d比例加人饮水中， 灌胃。为保证实验条件一致A组、C组每天2ml饮水灌胃，于实验 第4天，处死1B,2。组大鼠各6只，第21天处死其余全部大鼠。 3。检测指标: (1)于用药前及第4,7,14,21天分别检测大鼠尾血压及尿蛋 白(磺柳酸比浊法)。 (2)用药前及21天处死前分别检测尿肌醉及血肌配(日立 7600全自动生化分析仪)。 (3)血浆及肾脏组织AngII浓度测定，放射免疫法。 (4)HE染色和PAS染色观察肾脏形态学改变。 (5)检测TGF一0，表达，免疫组化法。 实 验 结 果 于抗FX,A注射后2周，2组(肾病组)大鼠均出现大量蛋白 尿，扫描电镜检查:肾小球基底膜增厚，上皮细胞足突融合消失，上 ·2 · 皮细胞下电子致密物沉积。证明模型建立成功。B组第4天始至 第21天，其尾血压明显高于A组、C组(P0.05);GFR低于A 组、C组(P0.05);第14天、第21天，B组尿蛋白增加高于A组、 C组 (P0.05)。肾脏AngII水平，1B组应用L一NNA4天后，明 显下降(P0.05),2。组下降更为明显(p0.01)，至21天，与对 照组无差异;血浆AngII水平，4天时1。组与对照组变化不明显， 至21天增加(P0.05),2。组变化趋势与1:组相同。B组经应 用L一NNA4天后，无明显形态学变化:应用L一NNA21天后，可见 动脉壁增厚