平邑甜茶_EM_MhVPE_EM_基因ihpRNA干扰载体构建及转拟南芥验证.pdfVIP

园 艺 学 报 2011 ，38 （12）：2365 –2372 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 平邑甜茶MhVPE 基因ihpRNA 干扰载体的构建 及转拟南芥验证 1 1,* 1 1 1 1 2 冉 昆 ，杨洪强 ，孙晓莉 ，沈 伟 ，姜倩倩 ，李 强 ，刘智新 1 （山东农业大学园艺科学与工程学院，作物生物学国家重点实验室，国家苹果工程技术研究中心，山东泰安 271018 ； 2 山东农业大学信息科学与工程学院，山东泰安 271018 ） 摘 要：根据平邑甜茶液泡加工酶（vacuolar processing enzyme ）基因 MhVPE （GenBank 登录号为 FJ891065 ）cDNA 序列，设计两对含有酶切位点的特异性引物 F1/F2 和 R1/R2 ，以pMD-MhVPE 质粒为模 板，分别克隆了用于构建干扰载体的正反义片段 pMD-F 和 pMD-R 。将该正反义片段分别插入表达载体 pART27 的相应位置，构建成了含有内含子发夹结构的 ihpRNA 表达载体 pART-RNAi-MhVPE 。通过农杆 菌介导，用花序浸泡法转化拟南芥进行验证，经过抗性筛选和 PCR 检测，得到 17 株转基因阳性植株；半 定量 RT-PCR 结果显示所获得的转基因拟南芥植株中 AtVPE 同源基因的表达量明显降低，表明该干扰载 体能够有效抑制 VPE 基因的表达，MhVPE 基因的 ihpRNA 干扰载体构建成功，为进一步鉴定该基因的功 能奠定了基础。 关键词：平邑甜茶；MhVPE ；RNA 干扰；ihpRNA ；拟南芥 中图分类号：S 661 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2011 ）12-2365-08 Construction of ihpRNA Expression Vector of MhVPE Gene from Malus hupehensis and Verification by Transgenic Arabidopsis thaliana 1 1,* 1 1 1 1 RAN Kun ，YANG Hong-qiang ，SUN Xiao-li ，SHEN Wei ，JIANG Qian-qian ，LI Qiang ，and LIU 2 Zhi-xin 1 （College of Horticulture Science and Engineering，Shandong Agricultural University ，State Key Laboratory of Crop 2 Biology ，National Research Center for Apple Engineering and Technology ，Tai’an，Shandong 271018 ，China；College of Information Science and Engineering ，Shandong Agricultual University ，Tai’an，Shandong 271018 ，China） Abstract