HBV S／HEV ORF2融合基因对番茄的遗传转化.pdfVIP

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2017-08-30 发布于河北
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HBV S／HEV ORF2融合基因对番茄的遗传转化.pdf

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维普资讯第30卷第4期长春理工大学学报 (自然科学版 ) Vo1．30 No．4 2007年l2月 JournalofChangchunUniversityofScienceandTechnology(NaturalScienceEdition) Dec．2oo7 HBVS／HEVORF2融合基因对番茄的遗传转化果洪宇，于源华，张振民 (长春理工大学生命科学技术学院．长春 130022) 摘要：应用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在戊肝病毒(HEV)ORF2部分序列的5 端，二者通过柔性肽 (Gly,Ser)：序列相连，构建成融合基因BE。将融合基因BE克隆到植物双元表达载体 pBin438上，获得 pBin438BE，然后用冻融法将其转入根癌农杆茵EHA105中，侵染丽春番茄子叶和下胚轴，经预培养、共培养、筛选培养、生根培养获得了5株抗卡那霉素的番茄植株。提取抗性植株基因组 DNA，进行 PCR及 PCR-Southem检测，4株获得阳性信号。初步表明目的基因已整合到了番茄基因组中。关键词：乙肝病毒 s基因；戊肝病毒ORF2；融合基因；农杆菌；转基因番茄中图分类号：Q789 文献标识码：A 文章编号：1672—9870(2007)04—0076—04 TransformationofTomatowithHBV S／HEV oRF2FusionGene GUOhongyu，YU Yuanhua，ZHANG Zhenmin (CollegeofLfieScience，ChangchunUniversityofScienceandTechnology，Changchun130022) Abstract： HepatitisBVirusSgenewasconnectedtothe5’endofHepatitisEViursORF2partialsequencewiththere- combinantPCRmethod，adesignedDNAsequencewhichencodedapolypeptidelinker(Gly4Ser)2wasusedtosplice thetworfagments．DNAsequencingresultsindicateelthatthefusiongene(BE)wassuccessufllyconsturctedTilefusion gene(BE)，wasclonedtotheplantbinaryexpressionvectorpBin438，andtherecombinantplasmidpBin438BEunderhte controlofDE35Spromoterwasconstructedna dtransformedintoAgrobactrlum turtlefaciensEHA105viarfeeze-thaw mehtod．Inbculatedexplantsrfom cotyledonsandhypocotylswereculturedsuccessivelyonpre—culturemedium、CO-cul- tivationmedium、selectivemedium nadroot—growthmedium．5Km-resistna ttomatoplna tswereobtained．Theregene- ratedplantletswereanalyzedfurtherbyPCRandPCR·Southern blot．Theresultsconfinnedthatthefusiongenehadbeen integratedintotomatogenome． Keywords：HepatitisBVirusSgene；HepatitisEViursORF2；tomato(13，lopersic