HIV-1 p15（Gag）基因的克隆、蛋白表达及抗体制备.pdfVIP

维普资讯 实用医学进修杂志 2007年第35卷第4期 JOURNALOFPRA叨 CAL1]RAI G0Fm DICINEV0L35 N 4 Dec．20o7 · 2l9 · HIV一1p15(Gag)基因的克隆、 蛋白表达及抗体制备 柳发勇 刘朝奇 史继静 杨 凡 余枫华 杨春秀 韩 莉。 任东明。 韩 钰 1 三峡大学 分子生物学研究所 (宜昌4_43002) 2 湖北省宜昌市 疾病预防控制中心 3 三峡大学 医学院免疫学教研室 摘 要 目的：构建 HIV一1pl5(Gag)原核表达载体 ，诱导蛋 白表达及制备多克隆抗 体。方法：用 PCR的方法扩增编码 p15(Gag)基 因序列 ，将其克隆到原核表达载体 pET28a(+)中，利用大肠杆菌表达系统表达 HIV一1pl5蛋白，分别用His抗体和 HIV阳 性血清做 westernblot鉴定 目的蛋 白的免疫原性。纯化 目的蛋白免疫家兔，制备多克隆抗 体 。通过酶联免疫吸附实验 (ELISA)，细胞免疫组织化学法检测抗体滴度及其特异性 。 结果 ：原核表达载体pET28a(+)一pl5(Gag)成功构建 ，可在大肠杆菌 BL2。(DE3)中用 IPTG诱导表达 ，得到相对分子质量约 20KD的p15(Gag)蛋 白，经 westernblot鉴定正确。 纯化蛋 白免疫家兔 ，制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论 ：得到纯化的HIV一1 p15蛋白，制备 的多克隆抗体能够检测 自然状态下病毒蛋 白p15(Gag)，为进一步研究 HIV一1奠定 了实验基础。 关键词 HIV一1pl5(Gag)基因；原核表达 ；免疫原性 ；多克隆抗体 Expression Cloningand AntibodyPreparationofHIV —lp15Gag LiuFayong LiuChaoqi ShiJijing，eta1． TheMolecularandBiologyInstituteof ChinaThreeGorgesUniversity，Yichang443002，China Abstract Objective：ToconstructexpressionvectorHIV一1pl5Gagand prepareditsantibody．M ethods：Thefulllengthgenefragmentofpl5 Gagwas amplifiedbyPCR．ThenitwasclonedintopET28a(+)prokaryoticexpressing vector．pET28a(+)一pl5GagwasinducedbyIPTGinE．coliBL21(DE3)and theexpressedproteinwasdetectedbyW esternBlot．Thepurifiedproteinwasused toimmunizerabbitstopreparepolyclonalantibody．Rabbitserum specificityand 通讯作者：刘朝奇(1962一)，男，博士 ，教授，硕士生导师。 维普资讯 实用医学进修杂志 2007年第35卷第4期 JOURNALOFPRACTICALTRAININGOFMEDICINE VoL35 No．4 Dee．21I)7 · 220 · itstit