岛津液相色谱常见问题及对策.pptVIP

欢迎参加岛津液相维修培训班 采用 “HPLC” 级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配 流动相的选择 其他问题 其他问题 水的等级 纯化水 蒸馏水 去离子水 波长 (nm) 纯化水 去离子水 因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高 纯化水中去除了无机和有机的污染物 吸光率 其他问题 水 / MeOH梯度 ODS 柱 鬼峰 Gradient Curve 1 ml/min, 0-100% MeOH over 10 mins and hold for 15 mins. 鬼峰的出现 其他问题 溶剂的等级 HPLC级 优级纯 分析纯 都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒 优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂 HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质 微量分析、梯度洗脱 其他问题 甲醇 乙睛 正己烷 分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图 其他问题 溶剂的过滤 滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。 醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。 尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂 脱气： 除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动 其他问题 脱气的目的 1. 防止由气泡的产生引起的故障 2. 防止由溶解（在液体中的）气体量 的变动引起的检测不稳定程度 1）示差折射率检测器 *使折射率变化 2）UV检测器（200nm以下） *溶解氧气有吸收 3）荧光检测器 *溶解氧气有消光作用 其他问题 其他问题 脱气的方法 1. 超身波脱气法 2. He清除法 3. 使用氟树脂膜的减压脱气法 其他问题 He清除法 调压阀 排气阀 往送液泵 流动相 过滤器 其他问题 氟树脂膜 真空室 往送液泵 真空泵 控制器 流动相 使用氟树脂膜的减压脱气法 梯度洗脱法 梯度洗脱装置： 高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入 低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。 梯度洗脱： 优点： 可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度 梯度洗脱法的注意点 溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差 梯度混合的溶剂互溶性要好 梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器） 查看空白实验的数据。 遵守分析周期。（最初的分析数据不采用） 样 品 处 理 1. 使用流动相溶解样品 -- 减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要 -- 保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀 其他问题 缓冲液 选择缓冲液的步骤 1 .确定最佳分离状态时的流动相pH 2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液 （即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液） 3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收 （在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液） 一些代表性弱酸的pKa pK1 pK2 pK3 醋酸 4.87 柠檬酸 3.13 4.76 6.40 磷酸 2.16 7.2 1 12.32 其他问题 缓冲液的使用 使用前必须过滤 使用后一定要进行清洗 ，以免造成腐蚀、磨损、阻塞: 用纯水冲洗30-60min（1ml/min），