Lipofectamine ^TM2000介导pIRES2-EGFP-NT3转染新生小鼠离体耳蜗基底膜的实验研究.pdfVIP

维普资讯 第 13卷第 6期 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 c}lineseJournalofOtorhinolaryngology--SkullBaseSurgery V0】．13Na6 2007年 12月 DeG 2007 · 基 础 研 究 · LipofectamineTM2000介导 plRES2一EGFP—NT3 转染新生小鼠离体耳蜗基底膜的实验研究 陈 杰 ，高 下 ，朱敏生 ，张文程 ，麻晓峰 ，顾香芳 (1．南京大学医学院附属南京市鼓楼医院耳鼻咽喉科，江苏 南京 210008；2．南京大学模式动物研究所 ，江苏 南 京 210032) 摘 要： 目的 构建真核表达质粒载体pIRES2一EGFP-NT3，检测其在阳离子脂质体介导下对新生小鼠离体 耳蜗基底膜的转染情况。方法 构建含有 目的基因NT3的真核表达质粒载体 pIRES2-EGFP-NT3后 ，在 阳离子 脂质体Lipofectamine~2000介导下将其转染新生小鼠离体耳蜗基底膜培养组织，转染后24h，通过Confoeal显微 镜观察小鼠离体耳蜗基底膜的转染情况和转染效率。结果 成功构建了真核表达质粒载体 pIRES2-EGFP-NT3， 通过阳离子脂质体LipofcetamineTM2000介导，该质粒在新生小鼠离体耳蜗基底膜转染的范围内转染进 17个细 胞 ，说明该质粒在阳离子脂质体介导下能转染新生小鼠离体耳蜗基底膜培养组织。结论 含有 目的基因NT3的 真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3的成功构建，及其在阳离子脂质体介导下对新生小鼠离体耳蜗基底膜培养 组织的有效转染 ，为研究 NT3基因转染对正常及致聋小鼠耳蜗效应的实验奠定了基础。 关 键 词：Neurotrophln3；柯替器；质粒；脂质体；耳蜗 中图分类号：R764．35 文献标识码：A 文章编号 ：1o07—1520(2007)06--0419--05 pIRES2-EGFP—NT3transfectedcultivation of basalmembraneofCortisorgan from neonatal mouseinvitrowithLipofectam ine2000 CHENJie，GAOXia，ZHU Min-sheng，eta1． (DepartmentofOtorhinolaryngology，GulouHospital，MedicalCollegeof Naziing University，N口 ing 210008，China) Abstract： Objective ToconstructpIRES2一EGF]P_NT3anddetectitstransfectionintheinvitrocultivationof thebasalmembraneofCortiSorgan from neonatalmouse．Methods Aftersuccessfulocnsturction ofPIRES2一 EG P-NT3，theinvitrocultivationofCortiSorgna from nocnatalmousewastrnasfectedbypIRES2一EGF]P-NT3 withthemediationofLipofectamineTM2000．Thetransfcetionefficiencywasnaalysedunderocnfoeal microsocpe24