、生物学活性及种群多样性研究.pdf

转Bt基因克螟稻秸秆还土对水田厌氧微生物及其生物学活性 及其种群多样性的研究 摘 要 转基因作物的生态安全性一直是人们关心的热点问题之一。本论文研究了转Bt基因克 螟稻秸杆还土对水田厌氧微生物、土壤酶活性、产甲烷活性、土壤细菌种群多样性及土壤产 甲烷细菌多样性的影响，并且对四种土壤DNA提取方法进行了比较，研究结果总结如下: 1、克螟稻秸杆还土对土壤厌氧微生物的影响 采用亨盖特厌氧技术及其滚管法研究了转基因克螟稻秸杆还土对土壤厌氧微生物数量 的影响，包括反硝化细菌、厌氧发酵细菌、厌氧自生固氮细菌、产甲烷细菌。实验结果表明， 在培养期间秸秆处理的土样N《Bt和NCk)组中各种厌氧微生物的数量均显著高于无秸杆对 照组 (No)(p0.05)。而转Bt基因克螟稻秸杆处理组 (NBt)的反硝化细菌数量、产甲烷 细菌数量要显著低于亲本稻秸杆处理 (NCO组 (p0.05)。但是，前者的厌氧发酵细菌数 量、自生固氮细菌数量要显著高于NCk处理(p0.05)a 2、克螟稻秸杆还土对土壤酶活性的影响 研究了克螟稻秸杆还土对各种土壤酶活性的影响，结果表明，在培养期间秸秆处理的土 样(NBt和NCk)组中各土壤酶活性均显著高于无秸杆对照组 N〔o)(p0.05).NBt处理土壤 的磷酸酶、纤维素酶活性与NCk处理相比只在培养前期有显著差异 (p0.05)，而脱氢酶及 其产甲烷活性则出现了显著的差异。在培养的前56d,NBt处理的脱氢酶活性要显著低于 NCk处理 (p0,05)，而在56d至84d期间，其脱氢酶活性突然显著升高，明显高于NCk处 理(p0.05)。在培养的前44d期间，NBt处理土样的产甲烷活性显著低于NCk处理p〔0.05), 而56d至84d期间，则显著高于NCk处理 (P0.05). 3、克螟稻秸杆还土对土壤细菌种群多样性的影响 采取聚合酶链式反应一变性梯度凝胶电泳((PCR-DGGE)的方法研究了转基因克螟稻秸杆 还土对土壤细菌种群多样性的影响。通过细菌通用引物扩增了土壤细菌的16SrDNA片段并 进行DGGE电泳，计算各个样品的Shannon丰富度指数和Pielous均匀度指数，以此分析各 处理样品的细菌种群多样性差异。结果表明，在培养的第3.4周时NBt处理土壤样品的 Shannon指数均明显高NCk处理的Shannon指数，而其它培养时间内二者没有表现出差异， 说明经过克螟稻秸杆处理土壤的细菌多样性在短期内要高于亲本对照处理。Pielous均匀度 指数在第2周和第6周要明显低于亲本稻秸杆处理。 4、克螟稻秸杆还土对土壤产甲烷细菌种群多样性的影响 为了解转基因克螟稻对淹水土壤中产甲烷细菌多样性的影响，采用产甲烷细菌特异性引 物扩增产甲烷细菌16SrDNA片段并结合PCR-DGGE方法，计算各个样品的Shannon指数 和Simpson指数，以此分析转基因水稻秸杆还土对水田产甲烷细菌种群多样性的影响。试验 结果表明，在培养的第7d-28d期间，NBt处理的上述两个多样性指数均明显低于NCk处理 而第42d-84d期间，则要明显高于NCk处理。 5,四种土壤DNA提取方法的比较 采用4种土壤DNA提取方法提取了5种类型土壤的微生物总DNA，并对4种提取方 法的DNA提取效果进行综合分析，进一步通过聚合酶链式反应·变性梯度凝胶电泳法 (PCR-DGGE)扩增提取DNA中的细菌16SrDNA片段，并对扩增产物进行DGGE电泳分 析。实验结果表明，SDS-高盐缓冲液法所提取的DNA得率最高，SDS-酚氯仿抽提法的DNA 得率最低。DNA纯度方面，以B10-101DNAextractionKit试剂盒法最高，改进试剂盒法纯 度最低。通过PCR-DGGE所反映的土壤微生物多样性分析结果表明，810-101DNAextraction Kit试剂盒法提取的DNA所代表的微生物多样性最全，而SDS酚氯仿法抽提的DNA代表 性最差。 关键词:克螟稻:厌氧微生物;PCR-DGGE:土壤DNA提取方法 EffectofBttransgenicrice(KMD)strawatthebooting stageonAnaerobicmicroorganisms,biochemicalprocesses andbacterialdiversityinfloodedsoil Abstract Thepr