虎杖中虎杖苷微生物发酵转化的研究.docVIP

虎杖中虎杖苷的微生物发酵转化研究 摘 要:从中药材虎杖中筛选到一株具有转化虎杖苷能力的根霉菌株T-34,利用该菌株产生 的B-葡萄糖苷酶能将虎杖苷转化为白藜芦醇.虎杖的液体发酵动力学研究结果显示:根霉菌 T-34能够直接利用虎杖煮提液中的碳源、氮源等作为其生长所需的营养,并且产生的B-葡萄 糖苷酶与底物虎杖苷的转化具有相对应的关系,用HPLC测得虎杖苷的转化率达98%. 关键词:微生物转化;虎杖;虎杖苷;白藜芦醇;B-葡萄糖苷酶 Biotransformation of polydatin fromPolygonum cuspidatum byRhizopussp. T-34 Abstract:Rhizopussp.T-34, isolated by strain-screening test, could transform polydatin into resveratrol during fermentation ofPolygonum cuspidatumin this experiment. Kinetics of fermentation was studied to follow the transformation process, and the results suggested thatRhizopussp.T-34 could utilize carbon re- source, nitrogen resource and etc directly as its nutrition, furthermore,B-glucosidase produced by the strain was correspondingly related to the transformation of polydatin, and the transformation rate of polydatin could reach 98%. Key words:microbial transformation,Polygonum cuspidatum,polydatin, resveratrol,B-glucosidase 1 引 言 虎杖始载于5名医别录6,为蓼科植物虎杖的干 燥根茎,主要有效成分为二苯乙烯类和蒽醌类化合 物,前者包括白藜芦醇及其糖苷[1].据报道白藜芦 醇具有抑制肿瘤、抗氧化、抗自由基、抗血栓、抗过 敏、抗动脉粥样硬化和具有冠心病、缺血性心脏病、 高血脂症的防治作用,白藜芦醇已被列为抗心血 管、抗癌最有前途的药物之一[2].干燥虎杖根茎中 白藜芦醇含量仅为0.1%~0.2% ,而虎杖苷含量 约为2%左右[3],虎杖苷可在肠道中被糖苷酶分解 释放出白藜芦醇,发挥其药理作用[4].目前有研究 用酸水解法对虎杖苷进行分解[5],但是酸碱会造 成环境污染,降低产量,因此不宜用化学法进行水 解.也有用改性纤维素酶直接对虎杖苷进行分 解[6],但成本较高、工艺较为复杂,不利于推广应 用.本项研究采用微生物发酵法转化虎杖苷,即没 有强烈的酸碱反应发生,又无需粗提苷,有效的避 免了上述两种方法存在的缺陷.因此利用专一微 生物进行发酵是提高虎杖中白藜芦醇含量的有效 2008年4月 第45卷第2期 四川大学学报(自然科学版) Journal of Sichuan University (Natural Science Edition) Apr. 2008 Vol.45 No.2途径之一. 2 材料和方法 2.1 材 料 2.1.1 仪器和试剂 虎杖购于成都同仁堂药房, 并经成都中医药大学药用植物鉴定室鉴定为蓼科 植物虎杖的根茎.白藜芦醇标准品(购于成都思科 华有限责任公司),高效液相色谱仪(美国Waters 公司),Tu-1800紫外可见分光光度计(北京普析通 用仪器有限责任公司),GBRT全自控10L发酵罐 (烟台高新区海洋生物工程研究所). 2.1.2 培养基 初筛平板:主要成分为0.2% NaNO3, 0. 1% K2HPO4, 0. 05% KCl, 0. 05% MgSO4, 0.01% FeSO4, 1%虎杖苷. 发酵培养基(复筛培养基):主要成分为虎杖 煮提液. 2.2 方 法 2.2.1 菌种的筛选 取自然长菌的虎杖粉1 g,加 入20 mL的无菌水,摇匀,静置片刻,取上清液0.5 mL梯度稀释,各吸取0.2 mL于初筛平板上按常 规涂布方法30e培养3~4 d,挑选长势良好的单 菌落,得到青霉,黄曲霉,木霉,根霉等四十株菌种, 保藏待用.将初筛菌种接入复筛培养基中,32e, 170 r/min摇床中发酵3 d.TLC和HPLC法检测 发酵产物. 2.2.2 TLC检测法 见文献[7] . 2.2.3