谷胱甘肽类似物Glu-Cys-Pro合成及抗氧化活性评价.pdfVIP

谷胱甘肽类似物Glu-Cys-Pro 的合成及其抗氧化活性 评价1 祁虹，高伟，王晓冬，李召虎, 段留生 植物生理学与生物化学重点实验室，中国农业大学农学与生物技术学院，北京（100094 ） E-mail：qihong@ 摘 要：用多肽合成仪人工合成了寡肽Glu-Cys-Pro（GCP ），以Pro 替换天然谷胱甘肽（GSH ） 中的Gly。通过测定离体条件下对DPPH 的清除率，以及在盐胁迫下对鱼腥藻7120 和烟草 BY-2 细胞生长、抗氧化能力和活性氧的积累的影响, 对GCP 的抗氧化活性进行了评价。结 果表明，GCP 在离体条件下对DPPH 氧自由基的清除率为61% ，与GSH 无显著差异。GCP 显著降低鱼腥藻7120 和烟草BY-2 中•O -产生速率和H O 含量，提高了细胞对DPPH 的整 2 2 2 体清除能力，显著缓解 100mM NaCl 胁迫对细胞生长的抑制。在离体和活体细胞抗氧化活性 实验中，GCP 效应均显著高于其组成氨基酸Glu 、Cys、Pro 单一和组合处理.结果证明GCP 有潜力作为一种新抗氧化活性寡肽，并且可能是以寡肽分子形式而非降解成氨基酸后起作用 的。 关键词：GSH 类似物；寡肽；抗氧化；Glu-Cys-Pro 中图分类号：O629.72 1. 引言 肽类活性物质作为植物体内一类重要的化合物，在植物的生长、发育、生殖、代谢以及 逆境防御中起着非常重要的作用[1,2] 。一些肽类作为植物激素，如系统素、PSK 等，调控着 植物的正常的生长和发育[3,4] ；一些天然的多肽类抗生素，具有广谱的抗菌作用，可以抗虫、 抗菌[5,6] ；植物体内还有一些寡肽，如谷胱甘肽（GSH ）。参与植物的抗氧化和抵抗逆境过 程[7] 。 生物体在正常生理条件下，体内活性氧自由基（ROS ）的产生和清除相对均衡，而在遭 受各种生物和非生物逆境胁迫时，体内的 ROS 的产生和清除平衡遭到破坏[8]，造成氧负离 子（•O - ）和过氧化氢（H O ）等ROS 的大量积累，引发蛋白质、核酸和脂类的氧化损伤。 2 2 2 GSH 是植物体内一种非常重要的抗氧化肽，参与植物对多种逆境的抵抗过程。它能够直接 和间接的清除ROS[9]，使细胞免受ROS 以及各种有害物质的毒害，具有抵抗逆境和解毒的 作用，已被广泛用于医疗保健方面。有研究表明，外源施加GSH 能够提高逆境胁迫下植物 [10,11] [10] 内源抗氧化酶的活性和抗氧化物物质的水平 ，降低MDA 的含量 ，保护植物免受活性 氧的伤害。但是由于植物体内存在 GSH 的代谢途径[9]，效应浓度和成本较高，目前尚难在 农业生产中大面积应用。 脯氨酸（Pro ）是植物体内一类重要的渗透调节物质，具有清除羟自由基的作用，是植 物在干旱、高温、高盐以及重金属等各种胁迫条件下累积的主要有机分子，很多研究表明 Pro 累积量与植物耐胁迫能力呈正相关[12~14] 。Pro 在胁迫条件下可以调节渗透平衡，维持蛋 [15] 白质、膜和亚细胞结构的稳定，清除活性氧 。 本研究模拟GSH 的结构，用与植物抗逆性相关的Pro 替换天然GSH 分子中的Gly，合 成了一种新寡肽，并通过离体和活体实验验证了其抗氧化活性，以期获得更稳定、廉价和高 效的抗氧化活性寡肽。 1 本课题得到国家高技术研究发展计划（批准号: 2006AA10A213）、教育部新世纪优秀人才支持计划（批 准号:NCET-06-0103）和霍英东教育基金会高等院校青年教师基金资助。 - 1 - 2. 材料与方法 2.1 试剂与仪器 CTC 树脂、