具有多靶标作用吲哚衍生物设计与活性的研究.docVIP

具有多靶标作用的吲哚衍生物的设计与活性研究 张丽娜，张文婷，王悦，曹宝帅，姜凤超* 华中科技大学同济医学院药学院，武汉（430030） 摘要：目的：设计与合成对GSK-3有特异选择性的小分子抑制剂，在增强药理活性的同时，降低因选择性差而导致的毒副作用。 具有增加微管装配起始点和速度，对微管聚合起促进作用的tau蛋白是一种含磷微管修饰蛋白。在早老性痴呆（AD）患者中，过度磷酸化的tau蛋白 AD p-tau 沉积在成对螺旋纤维中，最终形成神经纤维缠结 neurofibrillary tangles, NFT P[1]P。研究发现，异常磷酸化的tau蛋白不仅自身与微管蛋白的结合能力下降，而且还与微管蛋白竞争正常的微管相关蛋白，从而使微管解聚，影响了轴浆运输，进而造成神经元的变性，引起痴呆的发生P[2]P。因此，抑制tau的过度磷酸化将有可能阻止或者逆转NFT的形成，从而达到延缓AD进程或治疗AD的作用。 Tau蛋白的磷酸化同时受到蛋白激酶和磷酸酶的调节。其中，以糖原合成酶激酶-3 Glycogen Synthase Kinase-3, GSK-3 和蛋白磷酸酶-2A protein phosphatase-2A, PP-2A 的作用更为突出P[3]P，由于PP-2A又间接受到GSK-3的调节P[4]P，因此，GSK-3作为抑制tau过度磷酸化的靶点。 GSK-3通过其对底物蛋白的磷酸化可参与糖原合成、多种蛋白的转录激活、细胞生长与增殖、细胞分化、新陈代谢过程、细胞凋亡控制和神经元机制等过程。 并在神经性疾病ALS 肌萎缩性脊髓侧索硬化 P[5]P，双相精神紊乱症状PP，帕金森病P[6]P等疾病的治疗中起着重要作用。 研究发现，除了tau之外，GSK-3还同与AD相关的所有初期异常情况相联系，包括Aβ淀粉样蛋白、早老素及其他AD相关蛋白等P[7]P。有研究发现，GSK-3与淀粉样前体蛋白APP amyloid precursor protein 互相调控P[7]P，同时神经毒性实验证明Aβ42的细胞毒性由GSK-3介导，并且抑制GSK-3能够降低Aβ诱导的神经毒性P[8]P。因此，GSK-3成为AD治疗中关注的热点，GSK-3的小分子抑制剂将有可能成为治疗AD的候选药物。 目前已有许多小分子化合物显示出良好的GSK-3抑制活性。其共性为：分子量较小，多数具有疏水性且含有多个杂原子环状平面结构，与ATP竞争活性位点 除了Li离子，TDZD等 。 虽然已发现多种类型的ATP竞争性GSK-3抑制剂P[9 10]，但由于人体内存在着许多类型的激酶，提高抑制剂的选择性是增强其抑制活性，降低副作用的关键。B50CalB 11nM ，且该化合物的活性构象为较低能量构象 Energy 29.18kJ·molP-1P 。 图1，化合物IV与药效团模型的叠合 1.2 目标化合物的合成路线设计 根据目标化合物的结构特点，分别选择吲哚和色氨酸作为起始化合物，利用图2所示的方法合成出目标化合物。 图2 化合物的合成路线 二、实验部分 仪器与检测条件：红外： Bruker Vertex 70傅立叶红外光谱测定仪，KBr压片，500~4000cm-1波数范围内进行扫描。1H-NMR和13C-NMR： PARIAN MERCURY VX-300型核磁共振仪，以氘代DMSO为溶剂，TMS为内标。 2.1中间物合成 2.1.1 2,4-二乙氧基苯乙酮 1- 2,4-diethoxyphenyl ethanone 的合成 2,4-二羟基苯乙酮的制备：将研细的氯化锌35g 0.25mol 与20ml乙酸酐混合，机械搅拌成白色糊状。加入20ml冰乙酸，控外温110℃反应30min，浅黄澄清溶液。随后加入间苯二酚22g 0.2mol ，同时继续升温至130℃出现回流现象。回流反应1h，停止加热，搅拌下自然冷却。加入30ml浓盐酸，搅拌均匀，转移至烧杯中，静置过夜。有大量结晶析出，抽滤，滤饼用稀盐酸 3mol·L-1 洗涤2~3次，再用少量蒸馏水淋洗2次。真空干燥得22.0g橙黄结晶，产率72.4%，mp 147~148℃ 文献值141~143℃[] 将2,4-二羟基苯乙酮4.6g 0.03mol 、碳酸钾8.3g 0.06mol 、硫酸二乙酯8ml 0.06mol 和无水乙醇20ml混合，在微波辐射功率为130W条件下搅拌反应30min后，调整微波功率为325W继续反应5min 30sec×10 。反应完毕加入100ml蒸馏水，分液并用乙醚萃取3次，收集乙醚液。乙醚液用氢氧化钠溶液 0.2mol·L-1 洗涤2次后加无水硫酸镁干燥1h，抽滤，减压蒸去乙醚，置冰箱中冷却析晶。抽滤，滤饼用少量无水乙醇淋洗2次，得到2.4g白色结晶，产率41.2%，mp 67~68℃。4