5-氮杂脱氧胞苷对胰腺癌Bxpc-3细胞微小RNA-148a表达及细胞增殖的影响.pdfVIP

主生塞坠处塾盘查垫!堡生!旦箜!!鲞筮!塑鱼!边』垦狸!!!g：丛堕!垫!!：!丛：!!：塑!：1 ·673· ·简手艮· 5一氮杂脱氧胞苷对胰腺癌Bxpc一3细胞微小RNA一148a 表达及细胞增殖的影响 肖卫东 胡伟 蔡军 熊海蔚廖国良 李勇 ·SYBRPremixEx 17．0统计 目前已发现上百种微小RNA Taql”检测试剂盒行准差(面±s)表示。应用SPSS PCR反应。总体系20¨l，含5 软件中的t检验和单因素方差方析 (miRNAs，miR)在胰腺癌组织中表达异 pmol／L上 Green 常，其中miR．148a表达异常下调‘1J。本 下游引物各1wl，SYBR Mix(2X) (ANOVA)。 Reference11 0．4 二、结果 研究旨在观察去甲基化药物5．氮杂脱氧 10斗l，ROX Dye tLl， cDNA 胞苷(-Aza-CdR)对胰腺癌Bxpc一3细胞0．5斗l，ddH207．1¨l。反应条件 oC30 如下：94℃4min．94℃30s，50 S， 检测结果显示，实验组miR-148a相对表 miR．148a表达、CpG岛甲基化状态以及 细胞增殖的影响。 72℃40 达量为对照组的(2．93±0．11)倍，与对 S(40个循环)。由PCR反应曲 一、材料和方法 照组比较实验组miR-148a表达水平明 线得到阈值循环数(Ct)，以u6作为内参 1．材料：胰腺癌Bxpc．3细胞株购自 显上调(P0．01)。 照，计算miR．148a的相对表达量(RQ 中国医学科学院基础医学研究所基础医 值)=2‘A们‘。 2．两组细胞的miR一148a基因启动子 学细胞中心。5-Aza．CdR、噻唑蓝(MIT) CpG岛甲基化状态：MSP检测结果显示， 4．甲基化特异性PCR法(MSP)检测 Ex 购于Sigma公司。SYBR@Premix 细胞miR．148a基因启动子CpG岛甲基 化阴性，而对照组miR-148a基因启动子 Taq。”试剂盒购于TaKaRa公司。DMEM化状态：参照文献[2]设计miR-148a基 培养基、TrizolRNA分离试剂购于因启动子CpG岛甲基化特异性引物及非 CpG岛甲基化阳性。 Invitrogen公司。M-MLV逆转录酶购于 3．两组细胞的体外增殖活力：MrI-I法 甲基化引物。制备胰腺癌Bxpc．3细胞悬 Promega公司。EZgene“TissuegDNA 检测结果显示，与对照组比较，实验组细 液，蛋白酶K处理后采用EZgeneTM AppTec公司。Tissue