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草坪草总RNA 几种提取方法的比较1 李聪，曾会明，韩烈保 北京林业大学草坪研究所，北京(100083) E-mail：sciinfo@163.com 摘 要：本文分别采用DEPC 水法、TRIzol 法、CTAB-LiCl 沉淀法、SDS-酚法、SDS 提取 液抽提法以及异硫氰酸胍法等六种方法提取草坪草总 RNA ，通过检测对各种方法的提取效 果进行比较分析。结果表明，DEPC 水法是最经济、操作最简单的一种方法，并且提取的 RNA 质量较好、可靠性高、易于大量制备，是提取草坪草RNA 比较理想的方法之一，建议 使用该方法。利用TRIzol 法提取到的28S rRNA 亮度约为18S rRNA 的两倍，效果较好， 操作简单，符合分子生物学实验要求。CTAB-LiCl 沉淀法、SDS-酚法、SDS 提取液抽提法 也获得较高质量的RNA ，但存在不同程度的DNA 污染。异硫氰酸胍法提取RNA 有明显的 蛋白质污染，且RNA 部分降解，此种方法不予采用。 关键词：草坪草，总RNA ，提取，电泳 中图分类号：S722.3 1. 引 言 提取纯度高，完整性好的 RNA 是进行许多分子生物学实验的必要前提，如：cDNA 文 库构建，Northern 印迹杂交分析及寡聚(dT)纤维素选择分离 mRNA 等实验的成败在很大程度 上取决于 RNA 的质量 [1] 。 尽管 RNA 的提取已经成为很成熟的技术，但在实际研究中经 常很难顺利获得质量好的 RNA 。这主要归咎于很多因素（如材料的预处理不充分、器具不 洁净、操作不严格等）使得植物组织总 RNA 在提取过程中，容易受到内源和外源 RNA 酶 的降解。而且提取不同植物材料中 RNA 的最适宜条件及其相应方法也不尽相同,主要原因 是植物体内富含许多次生代谢物及蛋白质、多糖等大分子，这些物质影响 RNA 提取效率， 而且干扰其后的逆转录、酶切等实验操作[2，3]并且不同植物的代谢物，尤其是多糖及多酚 等化合物含量亦不相同，因此很难有一种方法适合于所有植物总 RNA 的提取。 因此，针 对不同植物组织的特点，对 RNA 的提取方法进行优化选择成为必要。本文通过对六种较常 用的提取方法进行检测比较，从而分析较好的草坪草 RNA 提取方法。 2. 材料和方法 2.1 实验材料 北京林业大学校园内种植的草坪草，主要为早熟禾、高羊茅混播草种。 2.2 主要试剂 焦碳酸二乙酯（DEPC ）、十六烷基三乙基溴化铵（CTAB ）、Tirs-HCl(pH8.0)、NaCl 、 EDTA 、β-巯基乙醇、聚乙烯吡咯烷酮PVP 、氯仿、异戊醇、 LiCl 、SDS、乙醇、异丙醇、 异戊醇、NaAc 、Tris-饱和酚（pH8.0 ）、TRIzol、水饱和酚（pH3.5 ）、异硫氰酸胍、十二烷 基肌氨酸钠、 柠檬酸钠（pH7.0 ）、硼砂（pH8.0 ）、DEPC水（O.1% ）、液氮 RNA提取中除含 Tris 的溶液外，均用0.1%DEPC水处理并高压灭菌，含Tris 的溶液用经 1本课题得到高校博士点基金资助.新教师基金，题目“我国重要乡土草种结缕草赤霉素分子调控机制研究”， 批准号（20070022042 ）的资助。 - 1 - 高压灭菌的0.1%DEPC水直接配制，玻璃器皿,镊子，剪刀则于 180 ℃干热灭菌 4h 以上，塑 料离心管、枪头、等均用0.1%DEPC水室温浸泡过夜后高压灭菌，电泳槽及加样梳用 无水 乙醇浸泡1h. 2.3 实验方法 2.3.1 DEPC 水法 (1)研磨： 称取0.1g 的新鲜草坪草叶片，用RNase free ddH2O洗两次，用滤纸吸干后，迅速放 入研钵（放之前研钵用液氮预冷）中，加入液氮，迅速研磨，研磨过程中保证也但不挥发干 净，至将