乙醇对CHSE-1细胞中细胞色素P450 2E1诱导的研究.pdfVIP

乙醇对CHSE-1 细胞中细胞色素P450 2E1 的 诱导研究1 1 1,2 1 3 1 1 张宁 ，杨先乐 ，王翔凌 ，林茂 ，喻文娟 ，张书俊 1 上海水产大学农业部渔业动植物病原库，上海（200090 ） 2 上海高校水产养殖学E-研究院，上海（200090 ） 3 集美大学水产学院，福建厦门（361021 ） E-mail: xlyang@ 摘 要：以乙醇为细胞色素P450 2E1 的诱导剂，在CHSE-1 细胞中研究了该诱导剂和酶活 性之间的时间效应关系和剂量效应关系。细胞传代后培养48h ，加入含有不同浓度乙醇的新 鲜培养基 ，孵育诱导24h ，之后加入底物苯胺反应30min。以苯胺的代谢产物4-氨基酚的 生成量来反映 CYP2E1 活性。发现苯胺作为底物在 CHSE-1 细胞体系中最佳浓度是 10 ～ 16mM，其基础代谢活性为0.152±0.095 nmol·min-1 -1 ·mg TP。以Gentox 模型对诱导的剂量效 应进行拟合，得到一个先升高后降低的曲线，经与基础酶活比较发现乙醇对CHSE-1 细胞中 CYP2E1 有先诱导后抑制作用。拟合方程参数P0 为0.13967,nH 为2.4575,k 为0.0244,EC50 为 34.9377 ，说明乙醇对CHSE-1 细胞中CYP2E1 有先诱导后抑制作用。CYP2E1 酶活性随着诱 导时间的增加逐渐增强，在选取的时间内发现 24h 酶活最高， 最高可达 0.4456±0.0916 -1 -1 nmol·min ·mg TP ，呈典型的酶诱导现象。建立了乙醇的诱导模型，同时还对其诱导模型进 行了分析和讨论。 关键词：细胞色素P450 2E1 ，CHSE-1 细胞系，乙醇，诱导 [1] ， 细胞色素P450 2E1 （cytochrome P450 2E1，CYP2E1 ），占P450 代谢的药物总量的7% , 参与多种外来化学物的代谢活化，包括大量的强亲电子物和前致癌物，至少有70 多种有机 化合物（如乙醇、酮、二烷基亚硝胺、卤族溶剂等）在体内被CYP2E1 代谢转化为有毒物质 [2～4] 。1998 年Kristen L.Wall 等人以氯唑沙宗为底物，首次报道硬骨鱼winter flounder 中有 2E1 代谢活性酶。并发现在污染地区，鱼类的肝损伤与哺乳动物极为相似[5]，开创了以鱼肝 脏中P450 酶系的诱导作为评价环境污染状况的生物学反应的局面。这种生物学反应的试验 材料包括鱼肝微粒体和细胞系。细胞系相比较肝微粒体，可不用加入NADPH 辅酶系统，反 应在整个细胞水平实现，可以更加准确地反映外源化合物的代谢、毒理和一般药理学特征 [6~9] 。而且细胞培养模型易控制底物以及诱导物与细胞的接触浓度和接触时间。故成为药理 毒理检测中的理想试验材料。 CHSE-1 (Chinook Salinon embryo) 细胞形态呈上皮状，生长周期短，一般1~2d 长满单 层，适合做毒理和药理方面检测用材料，但是在长期的传代培养中，细胞中蛋白酶活性会逐 渐降低甚至消失，而酶的活性高低决定了外源性化合物在细胞内的代谢速度，与毒物对机体 的最终毒性大小直接相关[10] 。以诱导剂诱导增加鱼类传代细胞中2E1 活性的研究国内外尚 未见报道。本试验以苯胺为特异性底物，以苯胺羟化酶（Aniline hydroxylase ，ANH ）活性 作为CYP2E1 的活性指标，以乙醇为CYP2E1 诱导剂，诱导增加C