光谱法研究聚烯丙胺与DNA之间的相互作用.pdfVIP

广西师范大学学报(自然科学版) 2003年 10月 JOURNALOFGUANGXINORMALUNIVERSITY Vol.21 No 光谱法研究聚烯丙胺与DNA之间的相互作用 周颖琳，李元宗 (北京大学 化学与分子工程学院，北京 100871) DNA双链结构中高密度负电荷的磷酸醋骨架提供了DNA与聚阳离子形成相对稳定的复合物的能 力.由于这些复合物可以通过质粒体提高细胞的转化效率，并且保护DNA不被细胞中的核酸酶所分解， 使得它们成为基因工程和基因治疗中非常有前景的领域，这也使得对于化学和生物工作者而言，研究聚阳 离子与DNA之间的相互作用显得非常的重要u[.}1 聚烯丙胺((PAA)是一种阳离子聚合物.PAA链上带正电荷的胺离子与DNA双链结构中带负电荷的 磷酸基团通过静电作用形成复合物.在PAA的存在下，DNA与澳化乙锭(EB)形成的络合物的荧光强度 大大地降低.本文应用动态光散射，荧光光谱和红外光谱等方法研究了DNA与PAA的相互作用 实验结 果表明，PAA对EB与DNA的相互作用起到非竞争抑制的作用，通过Scatchard荧光分析获得PAA与 DNA之间的结合常数为1.5X10mol·I一’.同时在PAA的存在下，DNA的二级结构发生了改变. 1 实验部分 试剂:纠卜鱼精 。NA(hsDNA)，北京经科试剂公司.聚烯丙胺(PAA),Aldrich公司.澳化乙锭(EB)，华 美生物工程公司. 仪器:激光散射光谱仪(AT_V/DLS/SI.S-5022F,Germany).F-4500荧光分光光度计(HITACHI). NicoletMAGNAAR750傅立叶红外光谱仪(Nicolet). 2 结果与讨论 21 动态光散射 用动态光散射法分别测定DNA,PAA和DNA/PAA复合物的水合半径(R,,).DNA和PAA的R分‘ 别为((2.810.4)nm和((5.2士。.5)nm.当将少量PAA溶液加人DNA溶液中时，体系的动态光散射强度 大大增加，并测得溶液中粒子的水合半径为((39.4士。.4)nm，说明DNA与PAA之间形成了大颗粒的复 合物. 2.2 荧光法研究 DNA/PAA复合物的形成 在PAA的存在下，DNA与EB形成的络合物的荧光强度大大地降低，表明DNA/PAA复合物的形 街下利于DNA与EB之间的相互作用.同时我们还研究了不同pH条件下P八A对DNA-EB体系荧光强 度的影响(图1)，实验结果表明DNA/PAA复合物的形成受pH的影响，这是因为DNA和P八八的构型 均受pH的影响. 2.3 PAA对EB与DNA之间相互作用的影响 通过Scatchard分析我们研究了在PAA存在下，EB与DN八的结合常数和结合比的变化，从表 1中 可以看出EB与DNA之间的结合常数和结合比随着PAA浓度的增加而降低，表明P八A对EB与DN八 作者简介:周颖琳(1979-)。女，博士.李元宗1((960-)，男，教授.研究方向:生化分析.电话:010E-mail;yli @chem.pku.edu.en. 广西师范大学学报(自然科学版) 第 21卷 之间的结合起到非竞争抑制的作用[3].同时我们获得PAA与DNA之间的结合常数为 1.5X105mol L一1. 2.4 红外光谱 我们通过显微红外技术比较了DNA与DNA/PAA复合物的红外光谱，发现在PAA的存在下，DNA 在1063,1222,1693cm-’处的磷酸基团和碱基的吸收带发生了位移，说明PAA与DNA的磷酸基团和 碱基均发生了作用.同时在PAA的存在下，DNA在1017cm-’处的吸收峰消失，这一峰是B一构型DNA 的特征峰，表明DNA的二级结构发生了改变，造成了一定程度上DNA构型的无序[41 loo* . 卯 、