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Neo基因 卡那霉素抗性基因编码的是新霉素磷酸转移酶II，基因记做neo，能通过降解G418、新霉素和卡那霉素来实现真核和原核细胞的相应抗性。 一般应用于原核生物就是卡那霉素抗性基因,应用于真核生物就是G418抗性。 外源基因导入ES细胞的方法有: 1.电穿孔法 2.逆转录病毒载体法 3.脂质体包装法 4.磷酸钙沉淀法 三、囊胚注射和杂交筛选 小鼠基因型的鉴定？ 标准品系： ES细胞品系：E14Tg2a (129背景)； JM8(C57BL/6N品系)； JM8A3(C57BL/6N 品系，Agouti毛色) 注射用囊胚品系：C57BL/6×C57BL/6 129和C57BL/6纯系小鼠 近交系Inbred Mice C57BL/6 129 C57BL/6品系较纯，回交较少代数后性状就能稳定。 129品系ES细胞的优点是它们比较皮实，容易操作。 C57BL/6 ES cell比较娇嫩。 表1.用基因打靶法制备的一系列重要的基因敲除小鼠及表型： 敲除基因 表现型 RAG-1和/或RAG-2 因无TcR基因重排而无T细胞 TcRβ 双阴性胸腺细胞聚集，双阳性胸腺细胞很少，TcRα正常重排 TcRα 有双阴和双阳T细胞而无单阳性T细胞 P56lck T细胞发育在早期双阳性成熟期受阻，无?δT细胞 CD3-ζ T细胞发育在早期双阳性成熟期受阻 CD45 T细胞发育在双阳性成熟期受阻 MHC-Ⅱ,不变链 无CD4+T细胞，CD4+CD8-/+很少，正常NK，1.1+CD4+,CD8+正常 CD4 CD8+数量和功能正常 MHC-Ⅰ，β－2微球蛋白 无CD8+ T细胞，CD4+T细胞正常 TAP1/TAP2 TcR-δ 无?δT细胞，对结核杆菌易感性增加 P59fyn T细胞发育正常，T细胞应答缺损 IgM穿膜区 晚期CD43+B聚集，无等位基因排斥 Λ5 CD43+细胞聚集，部分成熟B细胞出现延迟 IL－2 IgG1, IgG2a，IgG2b自身抗体增加 CD40L 高IgM,无生发中心，低IL－12和IFNγ，巨噬细胞活化受阻 CD28 IgG1，IgG2b减少 转基因动物的维持 Duke University Laboratory Animal Resources Center 胚胎的冷冻保存 国家遗传工程小鼠资源库 联系人：郭仕英 联系电话：025Email: guosy@ 网址： 地址：南京市浦口区学府路12号 The Jackson Laboratory Telephone+1.207.288.5845 Fax+1.207.288.6150 Mail: The Jackson Laboratory Customer Service 610 Main Street Bar Harbor, Maine 04609-1500 U.S.A. Online:JAX? Mice Online Order Request Form (secure interactive PDF) Email: orderquest@? 美国实验动物公司 美国实验动物公司 ? Charles River Laboratories, Inc. 251 Ballardvale Street Wilmington, MA 01887-1000 For General Inquiries? Phone: 978-658-6000 ? Fax: 978-658-7132? Ema
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