鲎素对几种常见基因工程菌的抑杀研究.pdfVIP

——54--—— 江苏农业科学2012年第40卷第8期 简 琛，张 燕，代建国，等．鲎素对几种常见基因工程茵的抑杀研究[J]．江苏农业科学，2012，40(8)：54—55，57 鲎素对几种常见基因工程菌的抑杀研究 简琛1’，张燕2，代建国2，张丽君2，朱俊晨2 (1．江西农业大学生物科学与工程学院，江西南昌330100；2．深圳职业技术学院应用生物技术系，广东深圳518055) 摘要：采用肉汤微量稀释法和M1fr法分别测定了鲎素对基因工程菌大肠杆菌BL21、枯草芽孢杆菌WB800、枯草 有不同程度的抑杀作用，考虑到鲎素基因表达量低甚至不表达，很可能是由于鲎素对宿主的抑杀作用，相比于其他基 因工程菌，认为丝状真菌里氏木霉QM9414作为鲎素的表达宿主有比较大的潜能。 关键词：鲎素；基因工程菌；MIC；表达宿主 中图分类号：Q93—3文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2012)08—0054—02 鲎素(TachyplesinI)是一种由17个氨基酸残基组成的鲎素具有较强耐受力的宿主成为当务之急。本研究比较了鲎 素对几种常见基因工程菌株的抑杀作用，旨在为选择鲎素基 阳离子抗菌肽(AntimicrobialPeptide，AMP)，可抑杀细菌¨1、 真菌旧1、病毒”1及抑制肿瘤细胞增殖。41和诱导癌细胞分因工程表达宿主奠定基础。 化b1，抗菌肽被认为是现有抗生素的最佳替代品，产品化的 1材料与方法 鲎素在食品、养殖及医药领域具有极大的应用价值，同时鲎素 的工业化生产也保护了稀缺的鲎资源。目前，全球海洋环境 1．1材料 污染日益加剧，加之对鲎资源保护不力，世界鲎资源濒临灭 1．1．1试验菌株大肠杆菌BL21，枯草芽孢杆菌WB800、枯 绝。鲎素提取效率极低(仅为0．32％)，人工合成鲎素成本极草芽孢杆菌BSl68、酵母菌GSll5、菌株由广东省微生物菌种 高，基因工程表达生产鲎素是实现其产业化的必由之路。相 保藏中心提供。里氏木霉QM9414由深圳大学馈赠。 比于其他已发现的阳离子抗菌肽，鲎素氨基酸残基数最少，较 1．1．2鲎素溶液的配制及保存鲎素制备：参考Nakamura 易人工合成，基因工程表达相对更容易一些。但鲎素对细菌、 等的序列哂1，由深圳市翰宇药业有限公司合成，纯度为95％ 真菌等表达宿主的广谱性抑杀严重制约了其发展，筛选出对 以上。合成序列： 000 鲎素溶液配制：首先用灭菌水配制成10mg／mL的鲎素胨、20g葡萄糖，蒸馏水1 mL，121oC，20min高压灭菌后 溶液，分装后一20℃保存备用，试验时根据不同浓度需要进 待用。酵母菌培养基YPD固体培养基：每升配方中含10g酵 行配制。 母提取物、20 g琼脂，蒸馏水 g蛋白胨、20g葡萄糖、20 1 000 1．1．3培养基及缓冲液的配制营养肉汤培养基：每升配方 mL，121℃，20min高压灭菌后待用。PDA培养基：用 中含蛋白胨10．0 于里氏木霉的固体培养，含20％马铃薯浸出液，1％葡萄糖， g，牛肉浸膏3．0g，氯化钠5．0g，蒸馏水1 000 min高压灭菌后待 mL，最终pH值7．44-0．2，121oc，20 2％Agar。20％马铃薯浸出液作法如下：将马铃薯去皮切碎， 000 用。营养琼脂培养基：每升配方中含蛋白胨12g、氯化钠5g、 每200g马铃薯加水1 m